第18经典液相色谱法.ppt
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1、第十八章 经典液相色谱法,第一节 概述 经典液相色谱法:采用普通规格的固定相,常压输送 流动相的液相色谱法称。,缺点:固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 离线检测、分析周期长 优点:仪器设备简单,费用低 对样品预处理要求不高 可同时分析多个样品 分类:吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法等 柱色谱法、平面色谱法 应用:产品纯度控制、杂质检查、天然药物有效成分分离、 中药定性鉴别等,第二节 液-固吸附柱色谱(如M. Tsweet法),(一)分离原理 (二)常用吸附剂 (三)色谱条件的选择,(一)分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的
2、吸附能力差异而实现分离,(二)常用吸附剂:多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺,吸附能力大小取决于吸附中心的多少和吸附中心与被吸附组分形成氢键能力的大小,1. 硅胶(SiO2H2O),结构:内部硅氧交联结构多孔结构 表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心 表面硅醇基存在形式:,游离羟基,吸附特性1:易吸水失活 105110烘干 0.51h(可逆失水)吸附力最大 活化(P469):铺好的硅胶板自然晾干后,在烘箱中于 105110烘干0.51h的过程 500 烘干(不可逆失水)活性丧失,无吸附力,2019/6/20,表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系,活性级越大,含水量越多
3、,吸附能力越小,活性越小 活性 活性级 吸附能力 吸水量,硅胶吸附特性2:与极性物质形成氢键,物质极性,吸附能力,k ,tR ,适用:分析酸性或中性物质,2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质,3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力强,组分越后出柱,(三)色谱条件的选择:,1. 被测组分性质(极性大小): 烃 - - - - - - - - 羧酸,醇 判断物质极性大小的规律: 基本母核相同,分子中基团的极性越强,整个分子的极性也越强 分子中双键越多,吸附能力越增,共轭双键多吸附
4、力亦增大 化合物基团的空间排列对吸附性也有影响。如能形成分子内氢键的要比不能形成分子内氢键的相应化合物的极性要弱,吸附能力也弱,色谱条件的选择依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 极性,2. 吸附剂的活性: 吸附剂的活性大,对被测组分的吸附能力强 强极性物质选择弱吸附剂 弱极性物质选择强吸附剂 3. 流动相的极性: 流动相极性大,对被测组分的洗脱能力大 “相似相溶”原则 :根据组分性质、吸附剂的活性, 选择适当极性的流动相 常用的流动相极性递增的次序是: 石油醚环已烷四氯化碳苯甲苯乙醚氯仿 醋酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水。,续前,续前,4. 三者关系图示: 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性
5、 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性,第三节 平面色谱法的分类和参数,分类 薄层色谱法TLC: 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 纸色谱法PC:分配色谱法 平面色谱参数 定性参数比移值Rf 相平衡参数K、k 分离参数分离度R,1、定性参数,比移值(Rf值) 溶质移动距离与展开剂移动距离之比 Rf =L/L0 (定时展开) L为原点(origin)至斑点中心(质量重心)的距离 L0为原点至溶剂前沿(solvent front)的距离 类似保留时间(定距展开) 与组分及色谱条件有关,2、相平衡参数,分配系数K= Cs/Cm 容量因子 k= CsVs/CmVm K、k与Rf值的关系:,讨论 Rf与K
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