第7章蛋白质化学蛋白质分离、纯化和表征1.ppt
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1、第7章 蛋白质的分离、纯化和表征 p290,一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定,一、蛋白质的酸碱性质,蛋白质分子由氨基酸组成,在蛋白质分子中保存着游离的-氨基和-羧基及侧链上的各种功能团,所以其物理化学性质有些与氨基酸相同。 蛋白质也是一类两性电解质,能和酸或碱发生作用。在蛋白质分子中,可解离基团主要来自侧链上的功能团,这些基团能解离为带电基团,从而使蛋白质带电荷。,在酸性情况下,蛋白质中的各碱性基团接受质子,使蛋白质带正电荷; 在碱性情况下,蛋白质中的各酸
2、性基团解离出质子,使蛋白质带负电荷。 在某一pH值时,白质所带的正电荷与负电荷恰好相等,即净电荷为零,此时溶液的pH值就是蛋白质的等电点。 每种蛋白质都有它特有的等电点,这也是鉴别蛋白质的指标之一。 等电点和蛋白质分子中所含氨基酸的种类有关 中性 碱性 酸性。,蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸含量 与等电点的关系,蛋白质,酸性氨基酸 每摩尔残基数,碱性氨基酸 每摩尔残基数,碱性/酸性,等电点,37,胃蛋白酶,6,0.2,1.0,血清蛋白,血红蛋白,核糖核酸酶,82,99,1.2,4.7,53,88,1.7,6.7,7,20,2.9,9.5,三、蛋白质的胶体性质 与蛋白质的沉淀,(一)蛋白质的胶体
3、性质 (二)蛋白质的沉淀,(一)蛋白质的胶体性质,蛋白质是高分子化合物,由于相对分子质量大,它在水溶液中所形成的颗粒具有胶体溶液的特征如布朗运动、丁道尔现象、电泳现象,不能透过半透膜以及具有吸附能力等。 利用蛋白质不能透过半透膜的性质,可用羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等来分离纯化蛋白质,这个方法称为透析法。,蛋白质溶液是胶体溶液(如血清、蛋清),胶体条件: 1.大小:1-100nm 2.有水膜:表面有许多极性、亲水基团 (-NH3、-COOH、-OH、-SH、-CONH2等)。 3.带相同的电荷(同性相斥),(二)蛋白质的沉淀反应,如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂,破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的
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