第8讲实验3薄层板的制备及活化.ppt
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1、1,天然产物化学,生物技术及应用专业,2,实验 三 薄层板的制备及活化 硅胶板,3,薄层色谱简介,薄层色谱中的吸附剂是铺在玻璃、塑料或金属片或薄板上的较薄的、均匀的一层细粉状物质,因支持剂的种类、制备方法和选用溶剂的不同,可按吸附、分配或二者结合的方式达到分离化合物的目的。 TLC中涂布的物质如硅胶、氧化铝、聚酰胺等。硅胶是最常用的薄层色谱吸附剂。,4,可以通过比较斑点的Rf值,或将未知样品与对照品在同一板上展开至同样高度,对样品进行初步的鉴定。 还可通过比较可见斑点的大小进行半定量的判断。 还可以通过光密度测量法实现定量测定。,5,一、目的要求,1掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法; 2掌
2、握吸附剂活度测定的原理及方法; 3会应用薄层层析法检测识中草药化学成分。,6,二、薄层板的制备,1不加粘合剂的薄层涂布法 (1)氧化铝薄层 (2)纤维素薄层 (3)聚酰胺薄层 2加粘合剂薄层的涂布法 (1)硅胶G薄层 (2)硅胶(H)羧甲基纤维钠(CMC-Na)薄层,7,(1)氧化铝薄层,将吸附剂置于薄层涂布器中,调节涂布器的高度,向前推动,即得均匀薄层。 本实验主要用下述简易操作涂布薄层,取表面光滑,直径统一的玻璃一支,依据所制备薄层的宽度、厚度要求,在玻璃棒两端套上厚度为0.31mm的塑料圈或金属环,并在玻璃棒一端一定距离处套上较厚的塑料圈或金属环,以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向,操作
3、时,将氧化铝粉均均地铺在玻璃板上,匀速向前推动。,8,(2)纤维素薄层,一般取纤维素粉1份加水约5份,在烧杯中混合均匀后,倒在玻璃板上,轻轻振动,使涂布均匀,水平放置,待水分蒸发至近干,于1002干燥3060分钟即得。,9,(3)聚酰胺薄层,取锦纶丝经一系列加工使其完全溶解成透明胶状溶液。 将此溶液适量倒在水平放置的洗净的玻璃片上,并自然向周围推匀,厚度约0.3mm,薄层太厚时,干后会裂开。 完全固化后变不透明白色,再放数小时后,泡在流水中洗去甲酸,先在空气中晾干,后在烘箱中0恒温加热活化15分钟,冷后置干燥器中贮存备用。,10,(1)硅胶G薄层,取硅胶G或硅胶GF一份,置烧杯中加水约3份混合
4、均匀(加水量根据实际情况自行调整),放置片刻; 随即用药匙取一定量,分别倒在一定大小的玻璃片上(或倒入涂布器中,推动涂布),均匀涂布成0.250.5mm厚度,轻轻振动玻璃板,使薄层面平整均匀;,11,在水平位置放置,待薄层发白近干,于烘箱中105活化0.51小时,冷后贮于干燥器内备用。 活化温度和时间可依需要调整,一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时,所用薄层板只在空气中自然干燥,不经活化即可贮存备用。,12,物质之所以能在吸附剂(以硅胶、氧化铝或正相键合硅胶为例)的薄层上分离,是因为吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点,被吸附物质(极性或可极化的物质)的量及被吸附的牢固程度在其它条件一
5、定的条件下取决于活性点的强度(单位面积的表面能量)及数目(单位质量的表面积), 单位质量吸附剂所含活性点的数目越多、活性点的强度越大,则吸附剂的活度越高,即,对物质(极性或可极化的物质)的吸附能力越强,被吸附物质的Rf值就越小。,13,当此类吸附剂的含水量增加时,吸附剂的活性点被水中羟基占据的数目增多,因此,自由活性点减少,吸附剂的活度变小,吸附力也变小,于是被吸附物质的Rf就变大。 因此, 为了使薄层板的水分含量相对一致, 使用对薄板进行活化可以使Rf值具有较好的重现性。,14,(2)硅胶(H) CMC-Na薄层,取羧甲基纤维素(CMC-Na) 0.2g,溶于25ml水中,在水浴上加热搅拌使
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