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1、医学微生物学实验三,南华大学病原学实验中心 微生物学与免疫学教研室,1、细菌的人工培养(讲授) 2、细菌的培养方法: 固体培养基接种法(自做); 半固体、液体培养基接种法(示教) 3、葡萄球菌、链球菌培养及生化(示教) 4、细菌的形态观察 自阅片:甲型链球菌、结核杆菌 示教片:淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌,实验内容,第四节 细菌的人工培养 p31,一、培养基(culture medium): 是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖 使用的混合营养物制品。,常用培养基的种类 按营养组成和用途分,厌氧培养基,基础培养基,增菌培养基,选择培养基,鉴别培养基,二、细菌在培养基
2、中的生长情况 据物理状态分 1、液体培养基: 均匀混浊、沉淀生长、表面生长(菌膜); 多用于增菌,均匀混浊,对照,沉淀生长,2、固体培养基: 含1.5%琼脂 用于分离培养 菌落:单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见 的细菌集团。 纯培养:挑取一个菌落,移种到另一培养 基中,生长出来的细菌均为纯 种,称为纯培养。 菌落特征大小、形状、颜色、气味、透明度、光滑或粗糙、湿润或干燥、隆起或扁平、边缘整齐与否、是否溶血等有助于细菌鉴定,菌落(S型),菌苔,菌落(R型),光滑型(S型) 粗造型(R型) 粘液型(M型),3、半固体培养基:含0.3%0.5%琼脂 鞭毛菌混浊生长(沿穿刺线呈云雾状/羽毛状) 无鞭毛菌
3、沿穿刺线呈线状生长 用于检测细菌的动力和保存菌种,斜面划线示意图,4、斜面培养基接种法,应用:短期保存菌种,三、人工培养细菌的用途,在医学中的应用 1.感染性疾病的病原学诊断:明确病因,指导用药 2.细菌学的研究:细菌遗传、变异、耐药性 3.生物制品的制备:疫苗、类毒素、抗毒素 在工农业生产中的应用 (抗生素、维生素、酶制剂等) 在基因工程中的应用( 基因工程菌乙肝疫苗),进入实验内容讲授,1、固体培养基(平板)接种法,分区划线法,原划线,标本:混合菌液 分组:1人一个固体平板,连续划线法,菌落示意图,细菌在固体培养基中的生长现象,细菌在固体培养基中的生长现象,菌 落 菌落特征:大小、形状、颜
4、色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐与否、溶血性等。 菌落类型: S型、 R型、 M型菌落。 菌 苔:指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌落(S型),菌苔,菌落(R型),光滑型(S型) 粗造型(R型) 粘液型(M型),注意事项,1、无菌操作 2、密而不重叠 3、勿划破琼脂 4、做好标记,第二天观察结果,2、葡萄球菌培养(示教),营养要求不高,普通培养基生长良好,菌 落: S型菌落,金黄色、表皮、腐生葡萄球菌各自形成金黄色、白色、柠檬色-脂溶性色素,血平板:,金黄色葡萄球菌形成的-溶血环,金黄色色素,白色色素,3、链球菌培养(示教),血平板上的菌落: 甲型溶血性链球菌形成
5、草绿色溶血现象,乙型溶血性链球菌形成透明的完全溶血现象,丙型链球菌无溶血现象。,甲链 溶血 草绿色溶血,乙链 溶血,丙链 不溶血,4、常见致病菌的形态与染色性,甲型溶血性链球菌,取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,自阅片之一,结核分枝杆菌,取材:痰涂片 染色法:抗酸染色 放大倍数:10X100,自阅片之二,菌体染成红色,细长略微弯曲杆菌,单个或分枝状排列; (非抗酸菌及细胞染成蓝色),淋病奈瑟菌,示教片之一,取材:泌尿道脓性分泌物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,淋病奈瑟菌,中性粒细胞分叶核,淋球菌染成红色/G-,肾形或豆形,成双排列,肉毒梭菌,示教片之二,取材
6、:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,G+粗短杆菌,芽胞呈椭圆形,比菌体粗,次极端,细菌呈汤匙状或网球拍状,产气荚膜梭菌,示教片之三,取材:小鼠腹腔渗出液 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,G+粗大杆菌,两端几乎平切,在被感染得人或动物体内形成明显的荚膜,炭疽杆菌,示教片之四,取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,G+粗大杆菌,有氧条件下形成椭圆形芽胞,位于菌体中央,白喉棒状杆菌,取材:纯培养物 染色法:美蓝染色 放大倍数:10X100,取材:纯培养物 染色法:Neisser染色 放大倍数:10X100,示教片之五,菌体细长弯曲的杆菌,粗细不一,常一
7、端或两端膨大呈棒状;排列不规则,呈栅栏状、V字形或L字形。异染颗粒,1、细菌的人工培养(讲授) 2、细菌的培养方法: 固体培养基接种法(自做); 半固体、液体培养基接种法(示教) 3、葡萄球菌、链球菌培养及生化(示教) 4、细菌的形态观察 自阅片:甲型链球菌、结核杆菌 示教片:淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌 第2页: 实验名称:细菌平板划线分离法 (记录实验结果绘一简图并描述平板上的菌落特征) 第3页 : 实验名称:细菌的形态观察(绘图) 甲型链球菌、结核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌,实验内容,第1页: 实验名称:细菌培养及形态观察,甲型溶血性链球菌 取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,结核分枝杆菌 取材:痰涂片 染色法:抗酸染色 放大倍数:10X100,淋病奈瑟菌 取材:泌尿道脓性分泌物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,肉毒梭菌 取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,产气荚膜梭菌 取材:小鼠腹腔渗出液 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,炭疽杆菌 取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100,白喉棒状杆菌 取材:纯培养物 染色法:Neisser染色 放大倍数:10X100,
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