大赛璐手性分析方法筛选与优化 (2).ppt
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1、业界之最,享誉全球,手性分析方法筛选与优化,主要内容,手性色谱基础和大赛璐手性柱 涂布型正相手性分析方法开发 涂布型反相手性分析方法开发 化学键合型手性分析方法开发 常见手性分析问题与注意事项,液-液萃取法,生物催化法 不对称合成法,膜分离法,传感器法,结晶法,毛细管电泳,色谱法,手性分离方法,手性色谱技术,超临界 (SFC),气相色谱(GC),薄层色谱(TLC),逆流色谱(CCC),模拟移动床 (SMB),高效液相色谱(HPLC),色谱法,手性色谱技术,对映体纯度测定方法及其比较,几十毫克,样品用量,需要其它的手性化合物来制备非对映体,需要真实样品,手性色谱固定相法基本原理,操作简单 不需要
2、预处理 准确度高,引入手性环境是实现手性分离的前提,Daicel手性色谱柱一览表,正相 直链淀粉衍生物 CHIRALPAK AD / AD-H/AD-3 CHIRALPAK AS / AS-H/AS-3 CHIRALPAK AY-H/AY-3 CHIRALPAK AZ-H/AZ-3 纤维素衍生物 CHIRALCEL OD / OD-H/OD-3 CHIRALCEL OJ / OJ H/OJ-3 CHIRALCEL OZ H /OZ-3 CHIRALCEL OA, OB, OC CHIRALCEL OF, OG, OK CHIRALCEL CA-1,反相 CHIRALPAK AD -RH/AD-
3、3R CHIRALPAK AS RH/AS-3R CHIRALCEL OD-RH/OD-3R CHIRALCEL OJ RH/OJ-3R CHIRALPAK AY RH/AY-3R CHIRALCEL OZ RH/OZ-3R,其它 Chiral -AGP CROWNPAK CR (), () CHIRALPAK OT(), OP () CHIRALPAK WH, MA () CHIRALPAK QD-AX CHIRALPAK QN-AX,共价键合型 CHIRALPAK IA/IA-3 CHIRALPAK IB/IB-3 CHIRALPAK IC/IC-3,大赛璐固定相: USPEP中国药典,涂
4、布型正相手性柱: 手性分析方法的建立和优化,分析条件优化流程图 (1),酸性,中性,碱性,1. 确认流动相中是否使用酸、碱添加剂,配制流动相,Hex/IPA/TFA =70/30/0.1,Hex/IPA/DEA =70/30/0.1,Hex/IPA =70/30,样品,碱性样品,添加物在分离中的作用,Hex/IPA/DEA=90/10/0.1,流量:1.0mi/min. 温度:25、检测波长:(254),流动相 Hex/IPA=90/10,Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1,流动相 Hex/IPA=90/10,流量:1.0mi/min.温度:40、检测波长:(254),酸性样品,(没
5、出峰 ),(无法分离 ),添加物的种类和用量,*1 主要用于1级胺 *2 主要用于1级氨基醇,Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow:2.0ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/DEA =85/15/0.1,不同添加剂对手性分离的影响,Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow:1.2ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.1,对于一些特殊的样品:酸碱添加剂同时添加,优化分离,Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 3
6、5 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1),Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1),Column: OZ-H (4.6(150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase: hexane/IPA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05),分析条件优化流程图 (2),保留时间?,长,适宜的分析时间 (10-30 min.),短,增加 异丙醇,
7、增加 正已烷,2. 配制好流动相,选择合适的手性柱,分析,分析条件优化流程图 (3),没有分离,部分分离,3. 选择合适的手性柱,尝试别的手性柱,OK!,基线分离,继续优化分析条件,分离?,筛选结果,色谱条件 流动相: Hex./IPA/ AcOH = 90/10/0.1 流量 :1.0ml/min. 温度 :40 检测波长 :UV254nm 样品 :,选择效果最好的手性柱, 然后继续优化分析条件,分析条件优化流程图 (4-A),部分分离,A.降低异丙醇浓度,B. 调整温度,C. 更换醇类,4.分析条件继续优化,醇浓度的影响,在多数情况下,降低醇的浓度可延长保持时间,改善分离度,Column:
8、AD, Temp.:40, Flow rate:1.0ml/min.,Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1,Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1,Sample:Flurbiprofen,部分分离,B. 调整温度,C. 更换醇类,4.分析条件继续优化,分析条件优化流程图 (4-B),A.降低异丙醇浓度,温度的影响,Column:CHIRALPAK AD Mobile phase: Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1, Flow rate:1.0ml/min.,25,40,Temp.: 5,降低柱温可增大值,但会使峰形变宽 升高柱温会减少值,但会使峰形尖
9、锋,Temp.: 25 Rs: 1.99,Temp.: 20 Rs: 2.78,Temp.: 15 Rs: 3.56,温度的影响,Column: CROWNPAK CR(+) (4.6*150 mm) Mobile phase: PH=1.0高氯酸 Flow: 0.3 ml/min Sample: 苏氨酸,部分分离,C.更换醇类,B. 调整温度,4.分析条件继续优化,A.降低异丙醇浓度,分析条件优化流程图 (4-C),由异丙醇换为乙醇-选择性增大,Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1,IPA和EtOH有时会使峰形和值发生明显变化,Column:CHIRALPAK AD Temp.:4
10、0, Flow rate:1.0ml/min.,Sample:Flurbiprofen,Hex./EtOH/AcOH=95/5/0.1,由异丙醇换为乙醇-更好的选择性,Column: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1),Column: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1),IA-H80I20DEA0.1-1.0mlmin-35,IA-M100DE
11、A0.1-1.0mlmin-35,OZ-H,Hexane/IPA /TFA/DEA= 80/20/0.1/0.05(v/v/v),1.0 ml/min,极性模式-意想不到的分离效果,OZ-H,MeOH/DEA=100/0.1(v/v), 0.8 ml/min,涂布型正相柱手性方法开发流程,根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物 调整正己烷/醇的比例,从而选择适当的保留时间 优化方法 流动相的醇浓度 降低醇的浓度能改善分离度,但会延长分析时间 色谱柱温度 降低柱温能增加值,但会使峰形变宽 流动相中醇的种类 改换醇的种类(IPAEtOH),有时会使选择性发生一些变化,化学键合型多糖手性柱: 手
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