次黄嘌呤核苷的提取及鉴定.ppt
《次黄嘌呤核苷的提取及鉴定.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《次黄嘌呤核苷的提取及鉴定.ppt(17页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、次黄嘌呤核苷的制备及初步提取,制药11301班第2组 成员:江呈风 陈俊 周丽 许欣 朱赢,一背景介绍,定义 次黄嘌呤核苷(inosine)也称肌苷。是以次黄嘌呤为碱基部分的核糖核苷的一种。次黄嘌呤核苷为白色结晶性粉末或类白色结晶性粉末,无臭;味微苦;在水中略溶,在氯仿、乙醇中不溶,在稀盐酸或氢氧化钠等碱溶液中易溶。肌肉中含量最多,酵母、尿液中也存在。从腺苷与亚硝酸作用或酶解脱氨后得到。紫外线最大吸收248纳米。在核苷磷酸化酶的作用下主成次黄嘌呤。 分子结构,分子式:C10H12N4O5 分子量:268.23,次黄嘌呤核苷,次黄嘌呤核苷的作用,次黄嘌呤核苷的用途十分广泛,是食品和医药产品的重要
2、中间体。在医药工业领域,肌苷可以直接透过细胞膜进入细胞内参与人体代谢,促进体内能量代谢和蛋白质合成,提高丙酮酸氧化酶活力,使低能、缺氧状态细胞的腺三磷水平提高。在医疗上广泛用于治疗心脏病、肝病及由放射线和抗癌药物所引起的白血球减少症、血小板减少症、视神经萎缩、中心性视网膜炎、并能预防和解除由血防药物引起的对心脏或肝脏的副作用;另外还是作为合成利巴韦林、阿昔洛韦等核苷类抗病毒药物的重要中间体;在食品工业领域,次黄嘌呤核苷是作为呈味核苷酸肌苷酸二钠的主要原料,与鸟苷酸二钠混合简称I+G,添加到味精中即是第二代、第三代味精,具有十分广阔的市场。目前,I+G需求量以每年10-20的速度增加。,二.制备
3、工艺,方法介绍,次黄嘌呤核苷的生产方法有化学合成法、菌体自溶法、发酵法。由于化学合成法需要大量有机溶剂,存在原料来源及环境污染等问题在生产中极少使用;菌体自溶法由于其效率太低目前也基本不用;发酵法生产次黄嘌呤核苷由于其产率高、周期短、控制容易等优点,目前已经成为工业化生产次黄嘌呤核苷的重要方法。以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)为发酵菌种制备核苷具有产量高、产物中副产物少、便于产物分离提取等优点,因而,枯草芽孢杆菌成为核苷发酵工业最重要的生产菌。,制备步骤,选用枯草芽孢菌GDIR-1005为保藏菌种; 将葡萄糖磷酸氢二钾硫酸镁苹果酸钠酵母粉琼脂水按10.20.10.22294.
4、5的重量百分比,配制成初级菌种培养基并装入茄瓶; 将步骤中的初级培养基接入保藏菌种,接种量为0.1,在温度370.5条件下静置培养20h2h后获得初级种; 将步骤得到的初级菌种,放入按葡萄糖磷酸氢二钾硫酸镁苹果酸钠酵母粉水30.20.10.21.595重量百分比配制成的摇瓶培养基中,并在往复式摇床上培养,16010转/分,温度370.5,时间周期1012h,当菌种镜检及OD等各项指标达标后即获得摇瓶液体菌种。,将葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、苹果酸钠、酵母粉、水按50.20.10.21.093.5的重量百分比配制成二级菌种培养基,并经121115min1min蒸汽灭菌后泵入二级种子罐,后降温至3
5、70.5接入摇瓶菌种,接种量为0.10.02;同时将经过0.250.3Mpa压缩、过滤后的无菌空气输入二级种子罐;此时通风10.20.4v/V.min,pH68,压力0.030.1MPa,培10h12h,经菌种镜检及OD等各项指标达标后即获得二级菌种;,将葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、苹果酸钠、酵母粉、水按150.20.10.10.883.8的重量百分比配制成发酵培养基,经1211、15min1min蒸汽灭菌后泵入发酵罐,后降温370.5接入二级菌种,接种量为100.5;同时在上述步骤中保压、无菌空气输入的条件下,将经1201、8min蒸汽灭菌后5070g/dL的葡萄糖液与0.20.02苹果酸钠
6、同时进行连续流加;此时通风比为10.30.6v/V.min,pH 68,压力0.04MPa0.1MPa,发酵50h60h进行培养;当产苷达到552g/L时,即获得次黄嘌呤核苷发酵液。,三.提取含次黄嘌呤核苷的RNA,1从枯草芽孢杆菌GDIR-1005中提取含次黄嘌呤核苷RNA(Trizol法处理) Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶.Trizol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。 匀浆处理 发酵菌液经离心(3000r/min,5min
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 次黄嘌呤 核苷 提取 鉴定
链接地址:https://www.31doc.com/p-2994462.html