生化分析方法.ppt
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1、临床检验基础,深圳迈瑞公司福州办 陈正杰,Company Logo,一:临床检验与医学的关系及基本概念 二:实验室生化、免疫试验的标本 三:实验室生化试验基础 四:实验室免疫试验基础 五:微生物检验基础 六:止血、血栓的实验室试验基础 七:糖化血红蛋白(HBA1C)实验室检查概述,临床检验基础,临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,一:临床检验与医学的关系 (一)、提供准确诊断;为准确诊断、及时治疗提供依据 1、白血病:血象和骨髓象(诊断) 2、肿瘤: 骨髓瘤(诊断) 3、贫血: RBC和Hb (为准确诊断) 4、细菌培养:准确的细菌 (为准确诊断) 5、药敏实验,(为及时
2、治疗),一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,(二)、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据 在疾病过程中,血液、体液、分泌物和排 泄物也会随之发生相应的变化 1、肝功能项目检查:分析病情(急性肝炎、慢性肝炎 肝硬化) 2、胆红素检查:观测疗效(黄疸减轻或消失) 3、血脂项目检测:判断心血管疾病、冠心病预后 HBA1C检查:判断糖尿病并发症的发生、预后 (HbA1c)水平7%者发生卒中的危险是HbA1c水平5%者的2.83倍 ),一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,(三)、为预防疾病提供资料 1、流行病学情况调查:结核抗体普查 2、地方病普查:
3、克山病(血硒检查) 3、职业病: 血铅检查 4、脱落细胞检查:肿瘤普查 5、血象:营养状况调查(Fe筛查,缺铁性贫血),一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,二、实验室检查的一般方法: 1、目视检查:直接观察标本颜色、透明度、性状,有无凝块或寄生虫 2、理学检查:液体的相对密度、血液比、粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化 3、显微镜检查:观察有型成分的数量和形态等病理变化 4、化学和免疫学检查:定性和定量检测标本化学、生物成分的病理变化 5、其他检查:基因扩增、电子荧光、芯片等,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,临床检验(Clinica
4、l Laboratory Technology or Science) 近代医学诊断体系的形成源于19世纪初叶法国Laennec奠定的胡典诊断学。 二次大战后,随着基础医学的飞速发展,实验诊断学也有了迅速发展,逐渐形成临床生化、临床免疫、临床微生物、临床血液等新的分支学科我国称谓“临床检验“,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,检验工作(分散型) 中心化 检验科 我国第一个建立的比较完整的检验科于1960年在南京军区总医院设立 我国医院检验科所属专业通常包括:临床检验学、临床化学、免疫血清学、血液学、微生物学和分子生物学,但每个专业的内涵近年有很大的发展,例如临床化学
5、按其涉及内容又可分为酶、脂类、电解质、气体分析、微量元素、糖及含氮化合物、治疗药物临测(TDM)、毒理检测等。,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,检验科专业分类,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,初诊后的 项目选择,解释,开医嘱,标本,准备标本,测定,报告,计算,准备病人,检验医学全流程图,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,临床检验对医生的建议:,1、合理选择检验项目并知晓其方法及特点 2、与实验室沟通并合作,确保准确、快速 时机的把握 病人的准备
6、严格监督标本的采集(SOPs) 3、客观评价检验结果,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,实验方法的分级,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,“金标准” “金标准”主要指活体组织检查、病原学检查、细胞学检查、特殊影像诊断、长期随访及临床医学专家共同制订的公认的综合诊断标准。 如: 1、肿瘤:病理切片报告 2:酶联免疫法PCR:罗氏Amplicore检查的HCV/TB等结果 3、HBA1C:HPLC(高压液相色谱法)测定的结果 4、甲功五项检查:目前的金标准是RIA(放射免疫法)测定的结果等。,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company
7、 Logo,实验方法评价的有关指标,敏感性 =( TP/(TP+FN) 100% 特异性 =( TN/(TN+FP) 100% 阳性预测值 = TP/(TP + FP) 100% 阴性预测值 = TN/(TN+FN) 100% (TP-真样性;FP假阳性;FN假阴性;TN真阴性),一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,试验方法选择,筛查:敏感性高的项目,防止假阴性 诊断:特异性高的项目,防止假阳性,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,正常值:正确应为”参考值“,参考值范围一般为“平均值 1.96SD”即包括95%的入选人群测试结果 注意: 1:
8、参考值内外均有生理和病理的可能,只是概率大小而已 2:不可过分依赖和机械使用“参考值” 3:任何检查项目均存在个体差异 4:在参阅检验结果时应充分考虑,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,常用的名词 标准品: 由一种或几种物理或化学性质已经充分确定,可被用来校正仪器或证实某种实验方法的物质。可分为: 1、一级标准品(原级参考物) 特点:a:值是唯一的 b:杂质已经定量 c:由国际组织或国家标准委员会发给证书 (如美国的NBS;中国国家临床检验标准委员会CCCLS;CRM470;NCCLS等),一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,例: CRM4
9、70,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,CRM470并非直接应用到常规实验室,更多情况下首先是作为诊断产品厂商制备标准母液和母定标曲线的参考标准。对提高不同实验室和不同方法所得结果的一致性、控制不同试剂批号的批间差异有重要意义。 由于不同方法的方法学(散射或透射比浊测定)差异、不同厂家试剂抗体选择和试剂抗干扰(脂血、溶血)能力的差异。 CRM470并非可以完全消除差异,但是通过 CRM470标准化,可以最大限度地提高检测结果的可比性。 罗氏特定蛋白标准的优势: 血清以正常人血清为基质 液体即用型标准 稳定性好,被测蛋白不降解(内含蛋白分解酶抑制剂) 去除了标准血清中
10、的脂质 空白本底小 基质效应少,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,同意参考范围的厂商 Hoffmann-LaRocheBecton ABIONDako Diagnostic Abbott Dade diagnostikc DuPont Beckman Instruments Bayer Diagnostics Human Gesellschaft fur Biochemica Behringwerke Johnson & Johnson Clinical Diagnostics BioMerieux Orion Diagnostica Boehringer Mann
11、heim Wako,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,2、二级标准品(次级标准品): 特点:a:值是唯一的 b:物质的量由参考方法定值或用一级标准品 比较而确定。 b:定值物质与测定物质基质相似。 例:罗氏c.f.a.s; 特定蛋白定标液,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,3、控制物(值控品): 特点:a:分为定值与未定值两种 b:定值的值有一定范围 c:由一、二级标准品以参考方法定值 例: 罗氏PPN;PPU等。,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,各级分析方法与标准品的相互关系,决定性方法:评价参考方 法及一
12、级标准品,参考方法:为二级标准品及 值控品定值,评价常规方法,常规方法:服务性实验室 的常规定量分析,值控品:质量保证,二级标准品:常规方法的工作标准 及为值控品定值,一级标准品:发展及评价参考方法, 校正决定性方法及参考方法,产生 二级标准品,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,溯源性 溯源性(可追溯性)Traceability 通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链,使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准,通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。 说明结果准确的依据。(寻根问源) (ISO17511、ISO18153),一:临床检验与医学的关系及基本概念
13、,Company Logo,罗氏C.F.A.S溯源,一:临床检验与医学的关系及基本概念,真值,参考性方法 比较分析方法,原始标定母液,C.f.a.s,ID-MS,HPLC,CRM470,原子吸光法测定不同项目的不同靶值,所有酶的项目的靶值采用手工方法用比色计在37度得出的ABS与摩尔消光系数计算得出,标准验室,Company Logo,质量控制(Quality Control。值控): 实验室为保证实验结果的有效性和改进工作质量所需的全部活动。 一、室内质量控制(Internal Quality Control) 为保证质量的实验室内工作全过程。包括 1、分析前的质量控制 2、分析中的质量控制
14、 3、分析后的质量控制,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,IQC常用的值控图: XSD(常用):均值值控图 解释: 1、95%结果都在2SD内 2、均数两侧分布的点几乎相等,不能 有连续5点在均数同一侧 3、不能有连续5次测定值渐增或渐降 4、不能有连续2点在2SD以外 5、不应该有落在3SD以外的点 MONICA值控图,不常用。,3SD,-3SD,2SD,-2SD,X,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,二、室间质量评价(室间值评、External Quality Assessment) 是由本实验室以外的某机构(临床检验中心、罗氏公司)
15、所执行的客观地评价实验室测定结果的一种体系(罗氏QCS). 注意:1、EQA是回顾性的,即对过去工作质量的评价 2、是以调查的方式 3、是评价,不是控制,V=(X-T)/T*100% VI=V/CCV*100,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,我国的CCV值选用WHO在国际室EQA中使用的CCV值(如:Glu7.7;TP3.9;Cre8.9等) 1985年全国生化值控会议采用的EQA分级为: VIS80为优秀,80VIS150为良好 VIS150为不合格 注:VIS是在统计中降VI50全部视为0后对VI的“称呼”,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company
16、Logo,罗氏QCS(Quality Control Service)的基础和优点 一、实现基础 检测系统 校准品定值溯源性 控制品定值溯源性 全球性比较 二、优点 在控:检测系统对患者标本检测结果实现了溯源性,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,检测系统,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,临床实验室管理办法,第二十五条 医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验项目进行室内质量控制,绘制质量控制图。出现质量失控现象时,应当及时查找原因,采取纠正措施,并详细记录。 第二十九条 医疗机构临床实验室参加室间质量评价应当按照常规临床检验方法与临床检验
17、标本同时进行,不得另选检测系统,保证检验结果的真实性。,一:临床检验与医学的关系及基本概念,Company Logo,第二十七条 医疗机构临床实验室定量测定项目的室内质量控制标准按照临床实验室定量测定室内质量控制指南(GB/20032302-T-361)执行。,一:临床检验与医学的关系及基本概念,二:实验室生化、免疫试验的标本,Company Logo,一、生化、免疫检验一般用血清、血浆。 二、特殊标本有尿液、脑脊液、炎性积液(胸腹 水、关节积液)等 三、特殊项目检查用抗凝全血 1、血气检查用抗凝动脉全血 2、HBA1C检查用抗凝静脉全血,二:实验室生化、免疫试验的标本要求,Company L
18、ogo,二:实验室生化、免疫试验的标本,Company Logo,标本因素对结果的影响,二:实验室生化、免疫试验的标本,1、静脉采血时,止血带使用时间过长,一分钟开始蛋白浓度开始升高,3-5分钟约升高5%,10-15分钟高达15%左右,Company Logo,二:实验室生化、免疫检查的标本,2、采血时握拳可导致血钾增高,握拳一分钟可使血钾增高1.0-1.5mmol/L,3、检测项目包括静脉给予的物质时应注意,5%的右旋糖苷中葡萄糖浓度为5000 mg/dl,内置导管常使用肝素,这种情况采血进行凝血试验结果显然不可靠,一边输液一边采血,既可能被污染又可能被稀释,Company Logo,4、抗
19、凝剂的影响(污染),二:实验室生化、免疫检查的标本,不同项目有不同的保护剂或抗凝剂,如EDTA钾可使钾升高,钙、镁、CK等降低,5、凝血试验的标本不宜先取,合理次序:无添加剂、少量抗凝剂、其他,Company Logo,标本采集的影响 除了急诊或其它特殊原因外,一般主张空腹12小时以后取血 影响检验结果的常见因素,二:实验室生化、免疫检查的标本,Company Logo,6、药物对检测结果的影响,二:实验室生化、免疫检查的标本,维生素C是一种还原剂,可干扰葡萄糖氧化酶法测定血糖,口服含黄体酮成分的避孕药引起血清胆固醇的升高,利尿药增加血钠和血钾浓度,非那西酊、别瞟吟醇、氨基水杨酸、雄性激素、环
20、磷酸胺、红霉素、消炎痛、异烟肼、6一巯基瞟吟、阿的平、烟酸、保泰松、磺胺药、吩噻嗪等。这些药物可使血清碱性磷酸酶、胆红素、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度或活性升高,Company Logo,吗啡可使血清淀粉酶、脂肪酶、氨基转移酶、碱性磷酸酶、胆红素等升高,使胰岛素、去甲肾上腺素等降低。 大麻可使血钾、钠、氯、尿素和胰岛素等升高,而使肌酐、尿酸、血糖降低。,二:实验室生化、免疫检查的标本,三:实验室生化试验基础,Company Logo,三:实验室生化试验基础,生物化学检验(biochemistry test)是以健康和疾病时的生物化学过程为研究目的,通过测定组织
21、、体液的成分,揭示疾病变化和药物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响,以提供疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防有用信息的一门学科。生物化学检验是医学的一个分支,它主要以化学和医学知识为基础,同时应用生物学、药理学、分子生物学、仪器学、计算机电子学等学科知识,它的独特研究领域、性质和作用,使其成为一门理论和实践性强的边缘性的应用学科。,Company Logo,临床生物化学的主要任务 :,三:实验室生化试验基础,阐述疾病的生物化学基础,疾病发生发展的生物化学过程,药物对疾病发生发展的生物化学过程的影响,生物化学检验则以检验方法、新技术的开发应用和检验质量的保证为主,并对检验
22、结果及其临床意义作出评价,为临床提供正确、有用的实验室信息。,Company Logo,生物化学检验包括 :,普通生化检验,特殊生化检验,急诊生化检验,床旁生化检验,其提供的检验项目可满足临床多种疾病的诊断需要,可对这些项目按不同类别进行编组,技术条件要求较高,并非在每个实验室都能开展,可通过中心实验室提供此类服务,开展临床紧急需求的、小规模的检验项目,能迅速地回报检验结果,一些小型的生化分析仪放置在病人床旁或医疗现场 ,使得能快捷、方便地得到检验结果,三:实验室生化试验基础,Company Logo,化学比色法 免疫比浊法 离子选择性电极电位法 电泳法,三:实验室生化试验基础,Company
23、 Logo,化学比色法,基本原理:根据朗伯比尔定律,特定波长的光通过溶液时,溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。待测物经过一定的化学反应生成的产物,对特定波长的光具有吸收峰,从而对物质进行定量检测。这是最常用的一种方法。 例:总蛋白,白蛋白、Glu、TG、TCH等的测定,三:实验室生化试验基础,Company Logo,免疫比浊法,基本原理:抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物,使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时,形成的复合物随抗原量增加而增加,浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射比浊,如检测透过光则为透射比浊。一般生化仪所用为透射比浊 例:前白蛋白,载脂蛋白等蛋白的测定,三:实验
24、室生化试验基础,Company Logo,离子选择性电极电位法,基本原理:根据能斯特方程,离子选择性电极法通过检测电极表面电位的改变,比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。 例:钾、钠、氯、PH的测定,三:实验室生化试验基础,Company Logo,电泳法,基本原理:在直流电场中,带电粒子具有向带相反电极移动的现象。血清中的蛋白质为双性离子,在碱性环境中带负电荷,在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷,带电荷多,分子量小则泳动快,反之则慢,从而将不同蛋白分离。 例:血清蛋白电泳,三:实验室生化试验基础,Company Logo,肝胆疾病的生物化学
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