骨髓细胞形态学检验.ppt
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1、第三节 血细胞形态学特征,一、血细胞发育过程中形态学演变的一般规律 血细胞发育:从原始到成熟有一定的规律性 1、细胞体积 (1)胞体由大到小(普通规律) (2)特殊规律:早幼粒大于原粒细胞 巨核细胞体积增大,2、细胞质: (1)量由少到多 (2)染色由深蓝到浅蓝 (3)颗粒:从无有嗜天青颗粒特异性颗粒 3、细胞核: (1)大小:由大到小,由规则到不规则(巨核细胞核由小到大) (2)染色质:细致疏松粗糙成块 4、核/质 比例:由大到小。,二、血细胞的形态学特征 1、红细胞系 (1)原红(normoblast):1522um (2)早幼红(basophilic normoblast):11-20u
2、m (3)中幼红(polychromatic normoblast):8-18um (4)晚幼红(ortho-chromatic nurmblast):7-12um (5)网织红(RC): 7.4um (6)成熟RBC(RBC):7.4um,2、粒细胞系统: (1)原粒细胞(myeloblast):11-18um (2)早幼粒(promyelocyte):12-22um (3)中幼粒(myelocyte) 中性中幼粒(neutrophilic myelocyte):10-18um 嗜酸性中幼粒(eosinophilic myelocyte):15-20um 嗜硷性中幼粒(basophilic
3、myelocyte):10-15um,(4)晚幼粒细胞(metamyelocyte):10-16um 中性 嗜酸 嗜硷 (5)杆状核粒细胞(stab granulocyte、 bandgranulocyte) 中性 嗜酸 嗜硷 (6)分叶核粒细胞(segmented granulocyte) 中性 嗜酸 嗜硷,3、淋巴细胞系统 (1)原淋巴细胞(Lymphoblast):10-18um (2)幼淋巴细胞(prolymphocyte):10-16um (3)淋巴细胞(lymphocyte) 大淋巴细胞 小淋巴细胞,4、浆细胞系统: (1)原浆细胞(plasmablast):15-20um (2)
4、幼浆细胞(proplasmacyte):12-16um (3)浆细胞(plasmacyte):8-20um,5、单核细胞系统: (1)原单核细胞(monoblast):15-25um (2)幼单核细胞(promonocyte):15-25um,核可见凹陷,切迹,扭曲或折叠 (3)单核细胞(macrophage):12-20um:核呈肾形,马蹄形,笔架形及“S”形。 (4)吞噬细胞(macrophage):单核细胞组织细胞巨噬细胞或吞噬细胞,6、巨核细胞学: (1)原巨核细胞(megakaryoblast):15-30um (2)幼巨核细胞(promegakaryocyte):30-50um (
5、3)颗粒型巨核细胞(granular megakaryocyte):50-70um (4)产板巨(thronbocytogenous megakaryocyte)。 (5)巨核细胞裸核(naked nucleus),7、其它细胞 (1)网状细胞 (3)纤维细胞 (2)内皮细胞 (4)组织嗜硷 (5)成骨细胞 (6)破骨细胞,三、细胞化学染色 概念: (1)细胞形态学为基础 (2)对骨髓片按一定程序染色 (3)显微镜下观察(细胞化学成分及其变化),(一)过氧化物酶染色 1、原理:细胞中的POX(peroxidase)H2O2O2氧化联苯胺呈蓝色+亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒。 2、结果: (
6、1)阴性:无颗粒 (2)弱阳性:细小颗粒分散 (3)强阳性:颗粒粗大而密集 3、意义: (1)急粒:强阳性 (2)急单;弱阳性 (3)急淋:阴性,(二)中性粒细胞碱性磷酸酶染色 1、原理:NAP(neutrophil alkaline phosphatase)的显示方法有偶氮偶联法: NAP(PH9.4-9.6)-磷酸茶酚钠-茶酚+重氮盐形成灰黑色沉淀(定位于酶活性处)。,2、结果: (1)5级分类 0级阴性 1级+ 2级+ 3分+ 4分4(+) (2)阳性率报告:计数100NC中阳性细胞分率。 (3)积分报告:100NC细胞的累积分数,3、参考区间:NAP:阳性率:10-40% 积分:40-
7、80分 4、临床意义: (1)感染性疾病的诊断:鉴别细菌或病毒感染 (2)CML和类白血病鉴别 (3)AA与PNH鉴别,(三)酸性磷酸酶染色 1、原理:ACP(acid phosphatase): ACP(PH5.0)甘油磷酸钠磷酸钠+硝酸铅磷酸铅沉淀+硫化铵反应棕黑色硫化铅沉淀。 2、结果:胞质内出现棕黑色颗粒为阳性反应。,3、意义: (1)多毛细胞白血病(hairy cell leukemia,HCE)诊断:HCL为阳性不被L-酒酶抑制 (2)T-B淋巴细胞鉴别:T阳性,B阴性 (3)协助鉴别Gaucher病与Niemann-Pick病:Caucher阳性,Niemann-Pick阴性 (
8、4)单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞ACP阴性。,(四)氯化醋酸AS-D茶酚酯酶染色 1、原理: AS-D(SE)氯化醋酸AS-D茶酚AS-D+重氮盐GBC偶联红色沉淀定位于胞浆中 2、结果:粒系阳性或强阳性反应 单核阴性或弱阴性反应 淋巴、嗜酸细胞、浆细胞阴性反应 3、意义: (1)急粒阳性或强阳性 (2)急单、急淋阴性反应,(五)-醋酚茶酚酯酶染色 1、原理:-NAE-醋酸茶酚-茶酚+重氮盐染料偶联黑色沉淀定位于胞浆中。 2、结果: 1、单核细胞阳性(灰黑色沉淀) 2、粒细胞弱阳性 3、淋巴细胞阴性 3、意义: 1、急单强阳性反应 2、急粒弱阳性反应,(六)糖原染色 1、原理:PAS
9、反应 过典酸(糖原)醛基+无色品红紫红色化合物 2、结果: (1)阳性:颗粒状、小块状或弥漫均匀红色 (2)分为:强阳性、弱阳性和阴性或阳性百分率 (3)粒系: 原粒阴性,早幼粒以下阶段阳性反应程度渐增强 单核弱阳性,淋巴细胞阴性 红系:阴性 巨核:阳性,3、意义: 1、红血病与巨幼贫鉴别:前者幼红细胞阳性,后者幼红细胞阴性 2、白血病:急粒:阴性或弱阳性 急淋:原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状 急单:呈弥漫均匀或细颗粒状 3、其它: Gaucher细胞阴性 Niemann-Pick阴性,(七)铁染色: 1、原理:(1)铁铁蛋白或含血黄素单核-吞噬细胞质内 (2)Fe3+亚铁氰化钾铁氰化铁沉淀(普鲁
10、土蓝) 2、结果: (1)细胞外铁:一、1+ 4(+) (2)细胞内铁: 含有铁颗粒的幼红细胞铁粒幼红细胞 油镜下计数100个幼红细胞计算其阳性率 I、II、和环状铁粒幼细胞,3、参考值: (1)细胞外铁:1+ 2(+),大多为2+ (2)细胞内铁:2090% 4、意义: (1)缺铁性贫血诊断 (2)非缺铁性贫血:如AA、铁粒幼细胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加 (3)MDS-RARS:环状铁粒幼细胞15%,四、细胞免疫分型: 1、用单抗和免疫学技术检测细胞表血特异性 2、分化抗原细胞所属系列、分化程度及功能状态。 (一)检测方法: 1、免疫荧光法(immme of luoresence t
11、echnique) (1)原理: 荧光标记的单抗+细胞表面分化抗原结合产生荧光 用荧光显微镜和流式细胞仪检测 直接荧光法、间接荧光法 (2)参考值:有荧光阳性细胞 无荧光阴性细胞,2、免疫酶染色法: (1)APAAP法(碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法): 一抗+CD抗原+AKP标记二抗底物显色 (2)PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶法) 一抗+CD抗原+POX标记抗体底物显色 (3)ABC法(亲和素生物素酶复合物)法: 一抗+CD抗原+生物素标记二抗HRP标记亲和素+底物,(二)细胞免疫分型的临床应用 1、有助于识别不同系列的细胞: 髓系:CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、
12、CD91、CD156、CD166 淋巴系:CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD52、CD77 巨核系:CD41、CD42、CD61 2、识别不同的淋巴细胞: T系统:CD2、CD3、CD4、CD7、CD8 B系统:CD19、CD20、CD22 NK:CD16、CD56,3、用于T淋巴细胞亚群检测: T:(CD3) TH(CD4+ CD8) TS(CD4 CD8+) 4、用于识别不同分化阶段的细胞: (1)造血干细胞CD34+、CD90+、lin (2)髓系祖细胞CD34+、CD33+ (3)T淋巴细胞系祖细胞CD34+、TDT+、C
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