细胞死亡判定--讲课用第四节.ppt
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1、细胞死亡判定,中南大学生物科学与技术学院 李杰 ,提 纲,细胞死亡判定意义 细胞死亡定义及判定方法 细胞死亡判定方法中存在的问题 细胞死亡判定方法使用兼谈人体死亡判定,一 细胞死亡判定意义,种子筛选,发 酵,抗癌药物筛选,二 细胞死亡定义及判定方法,细胞死亡的定义,细胞因受严重损伤而累及胞核时,呈现代谢停止、结构破坏和功能丧失等不可逆性变化,此即细胞死亡 呼吸- 代谢- 繁殖,平板计数法,1.繁殖力,克隆形成实验clonogenic assay,MPN most probable number,屏障作用,膜不对称性破坏,2 细胞膜,2.1 细胞膜完整性,显微镜观察? 电子显微镜?,染料类别,膜
2、通透性染料 非膜通透性染料,常见膜完整性检测用染料,传统可见染料:甲基蓝、Evans Blue、 Neutral Red,传统可见染料的不足,荧光染料:PI、SYTOX、SYBR,EB & FDA,流式细胞仪应用,流式细胞仪的优点,准确 快速:一般分选速度1000个/秒 大量 多参数同时分析(形状,尺寸大小,荧光颜色及强度),Lymphocytes:淋巴细胞,Monocytes:单核细胞,Granulocytes:粒细胞,PI & Annexin V-FITC分析细胞凋亡,问:凋亡细胞是活细胞还是死细胞?,2.2 细胞膜电位,测定细胞膜电位染料,正电荷:Rhodamine 123、Carboc
3、yanines, DiOC6(3), DiOC2(3), DiSC3(5) 负电荷:DiBAC(3),3. 能量相关,3.1 ATP,ATP测定方法,ATP,ADP,荧光素,加氧荧光素,荧光素酶,ATP法特点,敏感性高:可检测最少20个细胞 适用范围较广:可对实体瘤、胸腹水、血液等多种肿瘤标本进行体外药敏检测 时间短: 30-60分钟内,Tetrazolium 家族 四氮唑化合物,3.2 氧化还原脱氢酶,MTS 还原产物具溶解性,3.3 pH 梯度,检测染料,carboxyfluorescein (cF), BCECF, pyranine cSNARF-1,pH and Health,荧光素二
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