第三章 细胞生物学研究方法.ppt
《第三章 细胞生物学研究方法.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《第三章 细胞生物学研究方法.ppt(119页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、第三章 细胞生物学研究方法,进行初步观察,形成可验证的假说,设计对照试验,收集资料,解释结果,作出合理结论,查阅已 有知识,细胞生物学研究方法,细胞形态结构的观察方法 细胞组分的分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术,一、细胞形态结构的观察方法,光学显微镜技术(Light microscopy) 电子显微镜技术(Electron microscopy) 扫描隧道显微镜技术(scanning tunneling microscopy),(一)光学显微镜技术,普通复式光学显微镜技术(Light microscopy) 相差显微镜技术(Phase-contrast microscopy) 微分干
2、涉显微镜技术(Differential-interference microscopy) 荧光显微镜技术(Fluorescence Microscopy) 激光扫描共焦显微镜( Laser scanning confocal Microscope ),1、普通光学显微镜技术,结构 光学放大系统:物镜和目镜 照明系统:光源和聚光镜 镜架及样品调节系统,分辨率:指区分开两个质点间的最小距离。 d=0.61/ NA (NA= sin) d:分辨率 :波长 NA:数值孔径 :物镜与物体间介质折射率 :光束进入物镜的半角,2、相差显微镜技术,相差显微镜与普通显微镜的区别: 添加“环状光阑”和在物镜后焦面
3、上的“相差板”,偏转的光线分别通过相差板的不同区域,由于相差板上部分区域有吸光物质,使两组光线之间增添了新的光程差,从而对样品不同密度造成的相位差起“夸大”作用。最后这两组光线经过透镜又会聚成一束,发生互相叠加或抵消的干涉现象,表现出肉眼可见的明暗区别。,相差显微镜将光程差或相位差转换为振幅差,即明暗差别。相差显微镜的样品不需染色,可以观察活细胞。 光线通过不同密度的物质时,其滞留程度也不同,密度大则光的滞留时间长,密度小则滞留时间短。,3、微分干涉显微镜技术,以平面偏振光为光源。光线经棱镜折射后分为两束,在不同时间经过样品的相邻部位,然后再经过另一棱镜将这两束光汇合,使样品中厚度上的微小区别
4、转化成明暗区别,增加了样品反差且具有立体感。 适于研究活细胞。,4、荧光显微镜技术,原理:荧光物质,激发光,发射光 仪器:点光源(高压汞灯),滤色系统 荧光: 自发荧光:如叶绿素、维生素A 诱发荧光:甲醛蒸汽处理诱发细胞和组织中的生物单胺类产生荧光 荧光染料染色荧光 应用,5、激光扫描共焦显微镜,(二)电子显微镜技术,电子显微镜的基本知识 电镜与光镜的比较 电子显微镜的基本构造 电镜与光镜光路图的比较,主要电镜制片技术 超薄切片技术 负染色技术 冷冻蚀刻技术 电镜三维重构技术 扫描电镜(SEM,Scanning electron microscope),电镜与光镜的比较,1、超薄切片技术,2、
5、负染色技术,负染色:利用电子密度比标本高的重金属盐(如磷钨酸、乙酸双氧铀等)将生物标本包围起来,增强背景散射电子的能力以提高反差,在暗的背景下显示标本的形态结构。,3、冷冻蚀刻技术,方法 冰冻 快速低温冷冻法 将样品在液氮或液氦中迅速冷冻 断裂低温下断裂 蚀刻 复型,冷冻蚀刻技术主要用来观察断裂面的蛋白质颗粒和膜表面形貌特征,样品不需包埋、固定,能更好地保持样品的真实结构。,4、电镜三维重构技术,电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合,是当前结构生物学(Structural Biology
6、)主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。,5、扫描电子显微镜技术,特点:景深大,提供表面结构的立体图象, 分辨率大约为6nm (60埃) 样品制备:暴露 - 固定 - 干燥 - 镀膜,光镜、透射电镜、扫描电镜的比较,(三)扫描隧道显微镜技术,原理:量子力学中的隧道效应 装置:扫描的压电陶瓷,逼近装置,电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。 特点: 分辨本领高,(侧分辨率为0.10.2nm,纵分辨率可达0.001nm); 可在真空、大气、液体等多种条件下工作; 非破坏性测量。 用途:纳米生物学研究领域中的重要工具,二、细胞组分的分析方法,细胞组分的分离技术 特异蛋白抗原的
7、定位与定性 细胞内特异核酸的定位与定性 定量细胞化学分析与细胞分选技术,(一)细胞组分的分离技术,离心分离 层析分离 电泳分离,1、离心分离技术,原理 类型 差速离心 密度梯度离心,密度梯度离心,将待分离细胞组分小心地铺放在含有密度逐渐增加的、高溶解性的惰性物质(如蔗糖)形成的密度梯度溶液表面,通过重力或离心力的作用使样品中不同组分以不同的沉降率沉降,形成不同的沉降带。,类型 速度沉降:主要用于分离密度相近而大小不一的细胞组分。(介质:蔗糖) 等密度沉降:分离不同密度的细胞组分。(介质:氯化铯),2、大分子分离-层析技术,离子交换 凝胶过滤 亲和层析,3、电泳技术,聚丙烯酰胺凝胶电泳 双向电泳
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 第三章 细胞生物学研究方法 第三 细胞生物学 研究 方法
链接地址:https://www.31doc.com/p-3005299.html