解放军307医院EGFR突变检测经验分享.ppt
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1、解放军307医院EGFR突变检测经验分享,刘 毅 解放军307医院 全军肿瘤中心 肿瘤学研究室 & 肺癌分子诊断中心,开展EGFR突变检测面临的问题,一、是什么和为什么 二、怎么做及注意事项 三、临床问题的解决:转化性研究,一、是什么和为什么,EGFR基因的基本情况,EGFR:表皮生长因子受体,EGFR的胞内信号传导途径,EGFR与肿瘤的生长及酪氨酸激酶抑制剂(TKI),http:/www.egfr- Engl J Med 2004;350:2129-39,EGFR的突变类型,Nature Reviews Cancer 2007;7:169-181,肺癌靶向治疗的里程碑:IPASS研究,肺癌靶
2、向治疗的里程碑:IPASS研究,N Engl J Med 2009;361:947-57,肺癌靶向治疗的里程碑:IPASS研究,EGFR突变状态指导TKI类药物的使用,EGFR突变状态已成为患者能否在一线使用TKI药物的重要指标,二、怎么做及注意事项,目前较为常见的RGFR突变检测方法,http:/www.egfr-,EGFR突变检测中需要明确的几个基本概念,2、基因突变是指DNA发生碱基序列的改变:须选择有针对性的检测手段,针对非DNA的检测手段如:RT-PCR(检测RNA表达),免疫组化(检测蛋白表达)以及针对非碱基序列的检测手段如:FISH(检测DNA的扩增、缺失、断裂、融合)等,均不适
3、用。,1、EGFR突变为体细胞突变:发生于肿瘤细胞中,正常细胞(癌旁或白细胞等)不含突变。要尽可能取到足量的肿瘤细胞进行检测,这是保证检测结果可靠的根本前提。,EGFR突变检测中需要明确的几个基本概念,3、样品特性:异质性,突变细胞或DNA的含量一般较少,DNA经常会严重片段化 4、关键是保证突变DNA有效扩增至可检测的范围:扩增效率及检测方法的敏感性,1、TapMan 探针法:边扩增边检测,优势 只检测突变的序列 敏感性高且污染几率小 不足 探针费用较高 只能针对已知突变 正常DNA的扩增无限制,Nature Reviews Drug Discovery 2004:3, 749-761,2、
4、高分辨率溶解曲线(HRM):扩增后再检测,优势 已知和未知突变序列 敏感性高且污染几率小 不足 正常DNA的扩增无限制 对仪器设备的要求较高 阳性结果还需进一步确认,3、变性高效液相色谱分析(dHPLC):扩增后再检测,优势 敏感性高 已知和未知突变序列 不足 仪器普及率低 正常DNA的扩增无限制 开盖检测增加污染几率 阳性结果还需进一步确认 检测环境需独立且通风良好,4、直接测序法:扩增后再检测,优势 直观且相对成本低 已知和未知突变序列 不足 工作量大且敏感性低 开盖会增加污染几率 正常DNA的扩增无限制,Sanger 测序法原理,5、焦磷酸测序:扩增后再检测,优势 适合已知序列 已知和未
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