第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件.ppt
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1、第六章 ENA多肽抗体谱 免疫印迹检测,黑龙江中医药大学 临床医学院 诊断教研室 黄 萍,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第一节 概述 一、 何为ENA? ENA(Extractable nuclear antige) 盐水可提取性核抗原的总称。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,核抗原: 组蛋白 : 不溶于水 DNA ; 不溶于水 ENA: 可溶于生理盐水 是非组蛋白核蛋白,属酸性核蛋白抗原,是许多小分子量的RNA和多肽组成。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、多肽抗体谱 ENA抗体是指能与核中盐水可提取抗原发生特异性结合抗体,既是抗核抗体的一部分。,第六章 ENA多肽抗体
2、谱免疫印迹检测,ENA多肽抗体谱 是由许多小分子量的RNA和多肽组成。 不同的uRNA各有其相应的抗体。目前发现的相应的抗体已有十余种,其中,国际上共认的对风湿有特异的诊断价值的有七种。故将这七种抗体叫做多肽抗体谱,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,三、 免疫印迹 免疫印迹(Immunoblot IBT) 又称免疫转印技术。是一项新的生化技术。它对研究工作的影响与内切酶的发现和 PCR的基因扩增技术是等量齐观的。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理: 将凝胶电泳与固相免疫结合起来,其主要的操作过程分三个步骤。 1、分离 盐水可提取抗原(ENA)中多 肽按分子量的大小,
3、先用SDS 聚丙烯酰胺凝胶分离,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理: 2 、转移 将分离的组份从凝胶上转移到固相基质上,如硝酸纤维膜,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理: 3 、测定 对转移后的组份进行免疫法测定,显示出蛋白带。 既通过抗体的反应,用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽(呈显色带)的数量与分子量,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理: 免疫转印技术实际上是一项将凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的免疫转印技术。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点:,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹
4、检测,免疫转印技术优点: 1、高分辨率 免疫转印技术综合了电泳技术分辨率强的特点。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点: 2、高灵敏度 免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点,可检出最小蛋白质1pg(10-12g),第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点: 3、高特异性 免疫转印技术综合了免疫反应特异性,根据抗原抗体的特异反应,同一条蛋白印迹上可做多项分析。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点: 4、高度稳定性 蛋白印迹膜便于保存,可存放6-12 个月。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点: 5、设备简单,操作容易
5、免疫转印技术在临床检验中必有远大前程,并可能代替许多现有的传统检验方法。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第二节 检测对象 ENA多肽抗体谱 早期诊断SLE和多种风湿病, 有较高的特异性和敏感性, 有助于结缔组织病的诊断 和鉴别诊断,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,一、风湿病的定义 风湿病学是一门以内科学和临床免疫学为基础的新兴学科 其研究的对象是风湿性疾病,包括所有不同原因,以及不明原因引起的骨、关节、肌疾病。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,广义:涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症 的疾病 感炎性: 莱姆(Lyme)氏病 代谢性: 痛风 内分泌性: 甲状旁腺功能亢进 遗传性
6、; 粘液多糖病 退化性: 骨关节炎 生态环境性:大骨节病,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,狭义:主要指自身免疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎 (RA) 系统红斑狼疮 (SLE) 干燥综合症 (SS) 硬皮病 (PSS) 皮肌炎和多发行肌炎 (DM/PM) 混合性结缔组织病 (MCTD),第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、 适应症 1、临床上怀疑有风湿性疾病(结缔组织病或自身免疫性疾病),需进一步确诊者。 2、 已诊断为某种风湿性疾病,但需明确是否合并其它风湿性疾病,以指导治疗者。,第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、 适应症 3 、诊断未明,但有下列症状,需排除或 确
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