《实验动物与管理教学课件》实验动物微生物、寄生虫质量控制2012-4.ppt
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1、实验动物质量和环境、饲料控制及国家标准,2,1. 实验动物标准,3,国家标准中控制的项目,环境设施 建筑要求、设施类别、各技术指标、区域布局、污物水处理、笼具、垫料、饮水(GB5749)、动物的运输 遗传标准 遗传分类和命名、繁殖方法、质量监测 微生物和寄生虫标准 等级标准和各项目检测方法,4,实验动物环境的控制,影响实验动物质量的环境因素:气候、空气、声光、生物、居住、饮食、社会七类基本要素。 气候:温度、湿度、气流速度 空气:粉尘、气溶胶、有害气体(NH4、H2S、CO2等) 声光:声音和光照 生物:细菌、病毒、寄生虫等 居住:大环境(饲养设施和设备)小环境(笼器具、饮食器具等) 饮食:饲
2、料和饮水 社会:动物之间的关系,5,实验动物设施:生产繁育和动物实验,生产繁育设施特点:保护动物,防止外环境污染设施。 正压系统的屏障设施 人员淋浴进入,禁止外来人员进入; 具有严格的人流、物流、空气流通道,一般采用双走廊形式。 人流:最洁净区 洁净区 次洁净区 非洁净区 不同品种动物不同人员饲养,防止交叉污染,6,动物实验设施比较复杂。特点:防止设施环境污染外环境 分常规实验(正压系统)和特殊实验(负压系统)特殊实验包括感染性实验、放射性实验和化学性实验 设施设有双走廊和单走廊 人员可以不用淋浴进入 具有严格的人流、物流、空气流通道,往往在出口处设有风洞,防止正压系统的空气排入工作区 负压系
3、统的排风必须经过高效过滤后排出,7,普通环境设施特点:不完全控制传染因子,但符合动物居住的基本要求 动物实验设施需设有人流、物流通道; 能对室内的温度、湿度和换气进行 一定程度的控制。,8,隔离环境设施特点:人与动物不直接接触 保种动物饲养 进行感染性动物实验时,排风应进行高效过滤,9,人员管理,设施技术负责人 动物繁育、饲养管理人员 动物实验人员 设备管理和值班人员 兽医,10,物品管理,进入设施的物品必须根据设施环境标准,接受相应的消毒处理 与设施管理无关的一切物品,不得传入设施 常用传递设备:高压灭菌器、渡槽和传递窗,11,饲料管理,采购:必须来自具有生产许可证的单位,每批饲料都应附有质
4、量合格证明。 运输:轻拿轻放,清洁、干燥,防止破损,避免一切生物和化学污染 储存:低温、干燥和卫生,避免野鼠、虫媒的生物污染及其它化学污染 消毒:60Co照射,12,饮水管理,符合生活饮用水卫生标准(GB5749) 自动饮水器,检查饮水器极其管路装置是否完好、有无堵塞和污染问题 定期检查水质,13,垫料管理,采购:刨花和玉米芯等 存储:通风、干燥和卫生,避免野鼠、虫媒的生物污染及其它化学性污染。 消毒:高压灭菌,14,HVAC的管理,送、排风机及控制装置的管理 空调的管理 屏障设施中,还需要处理好风量、风速和洁净度三个相互关联的指标。 使用IVC或隔离器还应有断电报警装置和备用电源 设施的应急
5、保障,断电、断水等处理方案 对灾害事件的应急措施,15,遗传质量控制,名词: 遗传、变异和突变 近交系、封闭群和杂交群 遗传:生物体进行繁殖,产生与自己相似的生物,保证物种世代延续,使下一代在形态、特征、生理等各方面与上一代保持一致性称为遗传。 变异:遗传过程中,子代与上代在某些方面存在着差异或多或少的不同,子代个体间也有差异。这种后代与上代或子代兄妹间的不一致称为变异。 突变:动物遗传物质发生改变的结果。,16,近交系:经至少连续20代的全同胞兄妹交配或亲子交配培育而成,品系内所有个体都可追溯到第20代或以后代数的一对共同祖先,近交系数大于90%。 封闭群:以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个
6、实验动物种群,在不从其外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖4代以上,封闭群又称远交群。 杂交群:由不同品系之间杂交产生的后代。,17,命名,近交系命名,以大写英文字母命名,或大写字母+数字; 如:A系,TA1系,129P1/J、615等 亚系命名,在原品系的名称后加一道斜线,斜线后表明亚系的符号。 亚系符号包括 1)单位或人的缩写,如CBA/J,A/He 2)保持1个近交系有2个以上亚系,如C57BL/6J, C57BL/10J 3)一个近交系在其它地方保种,形成新的群体,如C3H/HeH 4)较早的命名,人们熟知的近交系,如C57BR/cd,BALB/c,18,转基因命名 背景品系+连接符+
7、转基因符号 如C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg 转基因符号:TgX(YYYYY)# Zzz (YYYYY)=插入的片段 # =实验室指定序号 Zzz =实验室注册代码,19,封闭群由2-4个大写字母命名,种群名称前表明保持者的英文缩写名称,第1个字母大写,后面的字母小写,一般不超过4个字母,保持者的缩写名称放在种群名称前。 近交系的命名规则和符号也适合封闭群的命名。 保持者的缩写名称放在种群名称的前面,二者用冒号分开 如:NIH,LACA,KM,20,杂交群命名:雌性亲代在前,雄性亲代在后,中间用字母X相连表示杂交。以上部分用括号括起,再在其后表明杂交的代数(如F1, F2)
8、如(C57BL/6 X DBA/2)F1=B6D2F1,21,饲料的质量控制,基本营养成分 蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质、纤维素、水 常规控制 粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、水分、粗灰分、钙、磷、,22,实验动物的质量监测,实验动物质量监测的意义 实验动物质量检测的依据和方法 实验动物常见的感染病原,http:/ 出血热、结核病、狂犬病、弓形体等 影响动物生产 鼠痘病毒感染、仙台病毒感染、兔出血热病毒感染 影响实验结果 污染实验材料 寄生虫对实验动物的影响,http:/ 确保实验数据的准确性和可重复性。,http:/ 2. 进行动物实验的动物(超过3个月)最好应用哨兵动物检测,评价实验结
9、果。,实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测,依据? GB GB/T ,实验动物质量检测依据和方法,29,2.检测方法,动物,编号,外观检查,麻醉,皮肤取样,取血,无菌解剖,检测,检测报告,真菌检查,分离血清,检查病毒抗体或其他病原抗体,气管分泌物、肠内容物、脏器分离细菌,http:/ 影响实验结果的病原:小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV),小鼠肝炎病毒(MHV),大鼠冠状病毒(RCV),线虫 新发病原:大小鼠细小病毒,乳鼠腹泻病毒,小鼠诺如病毒,螺杆菌,类阿米巴原虫。 条件致病病原:绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌、金黄色葡萄球菌、鞭毛虫等,41,实验动物常见的感染病原,http:/ 1981年,WHO统一
10、命名为肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever With Renal Syndrome,HFRS)。 实验人员感染最常见的病原。,1. 流行性出血热(Epidemic Hemorrhagic Fever,EHF),http:/ 出血热,对脂溶剂敏感; PH5.0以下,60,1h可使其全部杀死; 紫外线照射30分钟灭活病毒,布尼亚病毒科,汉坦病毒属,吸入型感染 接触型感染,http:/ 野生啮齿类带毒; 实验啮齿类很少发病,接触带毒野鼠感染; 人类感染是接触带毒动物。,http:/ 实验大鼠和野鼠感染不表现临床症状,无病理变化。 乳小鼠、乳长爪沙鼠的动物模型中,能观察到病变组织的广泛充
11、血、出血、渗出、坏死等,其中肾脏最为严重。,http:/ 特异性抗体检测,即间接免疫荧光试验、免疫酶染色法、ELISA试验、血凝抑制试验和空斑减少试验等。 病原检测。鼠肺冰冻切片免疫荧光检测、荧光定量PCR技术。,http:/ 防止野鼠进入设施; 所有进入实验室的物品(包括饲料、垫料)、生物材料(包括移植肿瘤等)必须检测是否HV污染; 实验大、小鼠群定期进行血清学检测。,http:/ 一旦感染,所有动物处死,物品高压灭菌,动物房清洁消毒。 饲养人员和实验人员应加强防护措施,定期体检。,http:/ 小鼠肝炎病毒病,小鼠肝炎病毒(House Hepatitis Virus,MHV)引起实验小鼠的
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