微生物转化井冈霉素制备假氨基糖类α-糖苷酶抑制剂的研究.ppt
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1、微生物转化井冈霉素制备假氨基糖类-糖苷酶抑制剂的研究,1,主要内容,一. 绪论及立体依据 二. 井冈胺标准品的制备及其分析方法的研究 三. 井冈胺转化菌株的筛选 四. 菌株的分类鉴定 五. 液体发酵工艺的优化 六.结论、展望及致谢,3,一.绪论及立题依据,1.1糖尿病概述 由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱,伴有因胰岛素分泌或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢异常。,一.绪论及立题依据,一.绪论及立题依据,型DM的主要致病机制是组织对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR),一.绪论及立题依据,一.绪论及立题依据,1.2.糖尿病的治疗药物及其作用原理,一.绪论及立题依
2、据,一.绪论及立题依据,按照-糖苷酶的来源不同,可将其分为微生物发酵来源、植物来源和食物来源三类。,1.3.-葡萄糖苷酶抑制剂的来源及分类,一.绪论及立题依据,-糖苷酶抑制剂的抗HIV功能 使HIV包膜糖蛋白前体因在内质网内进行N-糖基化时发生错误折叠而停留在内质网,干扰病毒的组装 -糖苷酶抑制剂与肿瘤 血管瘤的生成需要特定的细胞寡糖,抑制剂改变内细胞上与之相关的某些结构,有抑制肿瘤生长的可能,1.4.-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展,一.绪论及立题依据,井冈霉素(Jinggangmycins)又被称为有效霉素(validamycins),是上海农药研究所沈寅初等于1972年开发出的一种农用抗生素
3、,由从我国井冈山地区土壤中分离的微生物吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces. hygroscopicus var. jinggangensis)代谢产生,1.5.井冈霉素与-糖苷酶抑制剂,一.绪论及立题依据,一.绪论及立题依据,一.绪论及立题依据,一.绪论及立题依据,新型降糖药物的开发 微生物水解井冈霉素生产井冈胺 井冈胺制备、分离纯化及检测方法的建立 首次发现芽孢杆菌Bacillus oleronius 水解井冈霉素 为中试发酵提供了实验基础,1.6.本文的研究意义,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,2.1井冈胺标品的制备,3g阿卡波糖+3gNaOH100回流48h中和,离心
4、732阳离子树脂氨水洗脱DOWEX 12阴离子树脂纯水洗脱,减压浓缩0.1g井冈胺,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,2.2 所制井冈胺的结构鉴定(LCMS ),二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,2.3.1 井冈胺的TLC检测 展开剂A :乙酸乙酯:乙酸:水=3:1:1 展开剂B :正丁醇:乙醇:水:吡啶=35:15:40:10 展开剂C :正丙醇:乙酸:水=4:1:1,2.3 井冈胺分析方法发的确立,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,2.3.2.1 衍生化反应条件的确立,2.3.2井冈胺的HPLC检测,溶剂体系:井冈胺+1%对
5、氟硝基苯+1.5%三乙胺+二甲基甲酰胺 反应方式:水浴 反应温度:70,80,90,100 反应时间:20min, 30min, 40min, 50min, 60min, 70min, 80min,,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,反应温度对衍生化结果的影响,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,反应时间对衍生化结果的影响,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,2.3.2.2 井冈胺HPLC条件的确立 不同色谱柱对转化产物衍生物分离效果的影响,二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立,不同流动相比例对转化产物衍生物分离效果的影响 流动相A :乙腈:水=12::88 流动相B
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