产气荚膜梭状芽孢杆菌检验.ppt
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1、产气荚膜梭菌检验,食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验 Microbiological examination of food hygiene Examination of Clostridium perfringens,(魏氏梭菌),目录 1、概述 2、生物学特性 (菌体形态学特征、 培养特性和抵抗力) 3、毒素与分型 4、培养基和试剂 5、检验程序 6、说明, 09/uuoeoeoeuoeuuu.html,1、概述 产气荚膜梭状芽孢杆菌 又称魏/卫氏梭菌 分布:自然界广泛存在(创伤感染)。 易污染食品:动物性食品原料 食品加热后未及时冷却,所含耐高温而残余的产气荚膜梭菌芽孢会迅速发芽,大
2、量繁殖,菌数可达数10万/g,食用前又未加热,则有可能引起产气荚膜梭菌食物中毒。 食品中产气荚膜梭菌检验的主要目标是检验食品被该菌污染的程度,其重点项目是活菌数测定及证实试验。,2、生物学特性 1)形态与染色 G+(陈旧培养物阴性菌)无鞭毛可形成荚膜和芽胞的大杆菌 大小:为(12)m X(210)m 。 芽孢:卵圆形位于菌体中央或近端,直径大于菌体的 直径,有的菌株难形成芽胞。 荚膜:在人和动物活体组织内,或在含血清的培养基 内生长时可形成荚膜。,Clostridium perfringens,www.biol.vt.edu/ research/micimm/index.php,http:/o
3、regonstate.edu/research/Images/SarkerSlide.jpg,http:/ Diagnostik/Erreger/c_keim.htm,2)培养特性,*不严格的厌氧 *普通营养琼脂上可生长,若加入葡萄糖、血液则生长更好。 *适宜生长温度为3747。 *生长和繁殖速度极快,在适宜条件下8min/代。 *在45高温下可进行快速分离纯培养,每培养34h 传种1次,较易分离纯化。,Clostridium Perfringens Toxin,dtirp.dtra.mil/./ agents/AgentsBW_toxins.asp,肝片肉汤培养: 大量产气,培养5h-6h变
4、浑浊; 牛奶培养基中生长: 能够分解乳糖产酸,将酪蛋白凝固 产生大量气体,冲散酪蛋白, 使其成海绵状。 庖肉培养基中培养: 产生大量气体,肉渣或肉块 略带粉红,但不消化。 普通琼脂平板上培养: 15h 24h形成S型菌落, 在营养不足或琼脂浓度 高的平板上可形成锯齿状带 放射条纹的R型菌落。,www.msu.edu/course/ fsc/441/resulex10.html,at 45C, Clostridium perfringens is virtually the only organism that will produce the Stormy Fermentation 。,鲜血琼
5、脂平板生长: 菌落周围出现双层溶血环,内层溶血完全,外 层溶血不完全,好似靶状,菌落本身略带灰黄 色至浅灰褐色,与空气接触30min后,有时可能 逐渐变为灰绿色、甚至鲜绿色,这是本菌的特 征之一。,Clostridium perfringens shows double-zone hemolysis on blood agar. Note the small area of beta hemolysis (complete lysis of red blood cells) surrounded by a larger zone of alpha hemolysis (partial hemo
6、lysis). The plate is sitting on a black lab bench,www.cat.cc.md.us/./ labmanua/lab16/bloodcp.html,Clostridium perfringens Growing on Blood Agar,www.genomenewsnetwork.org/ articles/01_02/Clos.,www.cat.cc.md.us/./ labmanua/lab16/bloodcp.html,菌落周围出现乳光浑浊带,此反应能被本菌的 抗毒素抑制。 *由于发酵乳糖,菌落周围的培养基颜色发生变化 *本菌不消化牛奶,
7、不分解游离脂肪,菌落周围不出现透明环及虹彩层(肉毒梭菌可形成)。,www.sat.affrc.go.jp/./ Cl_perfringens.htm,乳糖牛奶卵黄琼脂平板上培养:,3) 生化特性 *发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖,产酸产气, *液化明胶 *还原硝酸盐为亚硝酸盐。 *能将亚硫酸盐还原为硫化物, 在含亚硫酸盐及铁盐 的琼脂中形成黑色菌落,*发酵牛奶中的乳糖,使牛奶凝固,同时大量产气,凝块碎裂,即所谓暴风雨式发酵”,这是本菌的重要生化特征之一,也是鉴别的主要指标。,4)抵抗力 A型与C型菌株的芽胞:耐热性强,煮沸13h, 繁殖型菌体不耐热。,www.pouch-hcho.co.jp/
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