中心实验室潘虹e-mailpanmuren263net.ppt
《中心实验室潘虹e-mailpanmuren263net.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《中心实验室潘虹e-mailpanmuren263net.ppt(45页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、,中心实验室 潘虹 e-mail: ,遗传病研究与诊断方法简介,什么是遗传病( Inherited disease/hereditary disease ) ?,是指生殖细胞(精子和卵子)或受精卵的遗传物质,包括染色体和基因发生畸变或突变所引起的疾病 特征 通常在上、下代之间按一定方式垂直传递 先天性疾病(不一定?) 常有家族史 终身性,遗传病的主要分类,染色体病:细胞遗传学 基因病 线粒体基因病 体细胞遗传病? 不同类型的遗传病遗传方式不同研究分析的方法不同,单基因病,多基因病,分子遗传学,细胞分子遗传学,染色体病,染色体的概念,染色体是细胞核内的基本物质,是基因的载体 染色体在细胞周期中以
2、不同的形态存在 从细胞间期到分裂中期,持续经历凝缩和舒展的周期性变化 在细胞分裂中期染色质通过多级螺旋化凝缩达到高峰,轮廓结构非常清楚,形成光镜看到的棒状小体,染色体病,由染色体异常或畸变引起表型异常(临床表现)称为染色体病 表型:多发畸形+ 智力低下+ 生长发育异常 染色体异常 染色体畸变染色体病,数目异常,结构异常,染色体病的诊断方法,细胞遗传学(cytogenetics) :研究染色体的学科 主要方法染色体核型分析技术(形态学),描述染色体时常用几个概念,正常体细胞核内染色体是二倍体(diploid),46,N女性:46, XX/ 男性46, XY 倍体(ploidy) :把人精子和成熟
3、卵子染色体数 23条定为一个染色体组,称作单倍体 (haploid) 整倍体:染色体数是单倍体的整倍数,如69, 92 非整倍体:不是整倍体的染色体数目如45, 47 同源染色体:有丝分裂中期看到的大小、形态和结构相同一对染色体,一个来自父亲,一个来自母亲 姐妹染色单体:由一个着丝粒连着的并行的两条染色单体,染色体分核型分析,染色体制备: 细胞培养:血细胞37含细胞生长刺激因子PHA培养 6872h 加Colcemid使分裂细胞止于分裂中期 低渗膨胀细胞、收获细胞 固定:甲醇和冰醋酸将细胞固定在玻片上 G显带:胰酶消化+ Giemsa 染色 核型分析:显微镜下阅片 分辨率:分裂中期(500条带
4、)510Mb,染色体畸变 数目异常,整倍体(euploid):多倍体,如三倍体(69)、四倍体(92)等 多倍体是致死性的,罕见有三倍体的活产婴儿,染色体畸变 数目异常,非整倍体(aneuploid):不是整倍体的染色体数目 超二倍体(hyperdiploid) ,如三体(trisomy)或多体:是指某一对同源染色体多一条或更多 活产婴儿中常染色体非嵌合状态的只有13、18、21三体综合征 亚二倍体(hyperdiploid) ,如单体(monosomy):某一对同源染色体丢一条 能存活的单体:是X染色体单体,染色体畸变 结构异常,原因:断裂,/-异常重接,发生率非整倍体改变 结构重排分为:
5、平衡改变:保留完整的染色体物质 非平衡改变:有染色体物质的丢失或/和获得 常见类型:缺失、易位、倒位、重复、插入、环形、双着丝粒和等臂染色体等 表型源于基因剂量的减少或增加,环染色体 ring chromosome,一条染色体二个末端发生断裂,断端相接呈环状 一条染色体二个末端发生融合,染色体结构畸变 平衡易位,携带者本人表型正常 生育产生18种配子 受精胚胎发育出生、正常生长发育只有正常和平衡易位配子 受孕异常染色体种类多,易发生流产、死胎、畸形儿出生等 受精后遗传学效应取决于不平衡染色体片断的大小(基因数目和性质),小结,细胞遗传学研究染色体 方法:染色体核型分析 分辨率:510Mb 染色
6、体数目异常多于结构异常 染色体结构畸变: 平衡表型正常+ 遗传效应(生育影响) 不平衡表型异常+ 生育影响,遗传病的主要分类 基因组病,染色体重排累及了1几个Mb (reviewed in Lupski 1998)/ 微缺失或重复 常规染色体核型(G显带)不能识别 分子细胞遗传学(molecular cytogenetics):主要应用基于原位杂交的有关技术分析基因组改变的学科,检测方法:分子细胞遗传学,主要方法基于原位杂交的有关技术(DNA片段+形态学),常用: 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH) 光谱核型(spectral ka
7、ryotyping, SKY)/ M-FISH 比较基因组杂交(comparative genomic hybridization, CGH)/ 微阵列比较基因组杂交,arrayCGH,遗传病的检测方法,传统细胞遗传学方法(核型G显带):分辨率510Mb 分子细胞遗传学分析方法: FISH:探针不同分辨率有差别(测已知) 缺失 1200kb(小缺失40kb) 重复5001000kb SKY:分辨率12Mb aCGH: 1M芯片分辨率 5kb 180kb芯片分辨率 30kb,FISH,是 20世纪80年代基于原位杂交技术发展起来的一项分子细胞遗传技术 探针:荧光素标记各种人类DNA序列(重要工具
8、) 单拷贝序列 卫星和端粒 DNA 重复序列 PCR 扩增后的位点特异性DNA序列 BAC 或YAC 文库的长基因组序列 显微切割得到的染色体区带或臂的特异序列 流式细胞仪分选染色体建立的DNA 文库,FISH,染色体FISH:探针与滴在玻璃片上的染色体DNA杂交 间期核FISH:探针与固定的非分裂细胞间期核直接进行杂交 FISH 技术将染色体分析从细胞分裂中、早期扩展到间期细胞 应用 基因定位和嵌合体克隆验证 确定染色体的微小缺失 染色体断点分析 间期细胞染色体异常的诊断(羊水、绒毛、卵裂球) 间期细胞(组织标本)基因丢失(LOH)扩增或重排,FISH 结果判定,荧光显微镜下计数100个间期
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 中心 实验室 mailpanmuren263net
链接地址:https://www.31doc.com/p-3107007.html