尿液蛋白质葡萄糖与酮体检测.ppt
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1、尿液蛋白质、葡萄糖与酮体检测,长沙医学院临检教研室 陈丽华,目的要求,掌握:尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良法。 熟悉:尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量控制。 了解:尿酮体的产生。 重点:尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良法。 难点:质量控制,肾单位是肾的基本功能单位,由肾小体和肾小管组成。 肾单位与集合管共同完成泌尿功能。,肾单位示意图,肾小球滤过膜有筛孔屏障和电荷屏障。葡萄糖可完全滤过,白蛋白难于滤过。,肾小球滤过膜示意图,影响肾小球滤过的因素:肾小球毛细血管血压。 囊内压。 血浆胶体渗透压。 肾血流量。,近球小管重吸收葡萄糖示意图,重吸收葡萄糖的部位仅限于
2、近球小管。近球小管重吸收葡萄糖有一定的限度。 正常情况下葡萄糖被全部重吸收入血。,Na,G,脂肪酸 乙酰辅酶A,乙酰乙酸,丙酮,羟丁酸,酮体在肝细胞中的生成,羟丁酸,乙酰乙酸,乙酰乙酰CoA,丙酮,自肺、肾排出,乙酰CoA,酮体的氧化示意图,酮体肝内生成肝外利用,尿液蛋白质检查,一、概述,1.历史:1673年,弗雷德里克.德克斯(Frederick Dekkers)用加热醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白。 1790年,弗兰西斯.贺母(Fancis Home)用硝酸法检测水肿患者尿液中的蛋白。 1827年,理查德.伯瑞特(Richard Bright)用加热的方法检测肾病患者尿液中的蛋白,2.正
3、常尿蛋白的含量和组成:尿蛋白总量为30130 mg/24h,一次随机尿为080mg/L。 蛋白定性试验:阴性。 主要成分是相对分子质量小的蛋白如2微球蛋白、2微球蛋白、溶菌酶等。 3.蛋白尿:尿蛋白总量超过150mg/24h或100mg/L,蛋白定性试验:阳性。,二、病理性蛋白尿分类及原因,1、肾小球性蛋白尿:最常见 (1)选择性蛋白尿:当肾小球损伤较轻时, 以49万的相对分子质量中等的清蛋白为主,可伴抗凝血酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对分子质量的2M、Fc片断等。 Pro:+-+. Pro大于3.5g/24h. 最典型的是肾病综合症。,(2)非选择性蛋白尿,反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损
4、伤。以分子量较大和中等的蛋白质同时存在为主,Pro:。定量0.53g/L。多见于原发或继发肾小球疾病。,2.肾小管性蛋白尿:,感染、中毒引起。小分子蛋白质尿,Pro:。定量12g/L。常见于肾小管疾病。,3、混合性蛋白尿:肾小管和肾小球同时损伤,大中小Pro均增多。 4、溢出性蛋白尿:指血液循环中,出现了以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质,如:游离Hb、肌红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多,经肾小球滤出,超过了肾小管的重吸收最大能力,而大量出现在尿中。Pro:。常见于MM。 5、组织性蛋白尿:肾组织代谢产生、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等。Pro:;多为TH糖蛋白,三、生理
5、性蛋白尿,1.功能性蛋白尿:剧烈运动、发热、寒冷刺激、精神紧张、交感神经兴奋等,多见与青少年。 2.体位性蛋白尿:又称直立性蛋白尿,特点:卧位时尿蛋白阴性,起床活动或久立后,尿蛋白阳性,平卧后又阴性。多见于发育期少年。 3.偶然性蛋白尿:又称假性蛋白尿,混入多量血液、脓液、粘液或生殖系统分泌物,如:白带、月经血、精液、前列腺液等。,尿蛋白,血浆蛋白,组织蛋白,肾小球性,肾小管性,混合性,溢出性,组织性,泌尿系统、泌尿外系统,肾病综合征、肾病性蛋白尿,原发、继发肾小球疾病,肾小管间质病变、中毒性肾病,浆细胞病、血管内溶血、肌肉损伤,肾脏疾病、炎症、中毒、泌尿道结石,泌尿道、生殖道炎症、出血、排泌
6、物污染,四、蛋白质定性检测方法,(一)加热乙酸法 1.原理:加热煮沸使蛋白变性、凝固, 然后加酸使尿液pH接近尿蛋白质等电点,在含有适量无机盐状况下,蛋白质更易于变性沉淀。 加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶所致的混浊。 2、材料:酒精灯、试管、试管夹、滴管 3、试剂:醋酸,(一)加热乙酸法,4.操作:(1)取大试管1支,用试管夹夹住管底部,加尿液至试管2/3处。 (2)斜持试管下端,在酒精灯上加热下1/3处,煮沸即止。 (3)加5%乙酸23滴,再煮沸后立即观察结果。 (4)结果判断如下:,实验结果 结果判断 相当含量(g/L) 清晰透明无 - 0 改变 黑色背景下, 0.10.15
7、极轻度混浊 明显白色雾状, + 0.20.5 但无颗粒 明显混浊, + 0.62.0 出现颗粒 大量絮状沉淀 + 2.05.0 但无凝块 严重混浊, + 5.0 有大凝块,5.注意事项,(1)操作程序要对:加热 加酸 再加热。 (2)加入醋酸量要适当,pH9或pH3可以产生假阴性。 (3)加热时使底部受热,上部好作对照。 (4)加热时管口勿对别人。,加尿液1ml,判断结果,(二)磺基水杨酸法,1.原理:在酸性条件下,磺基水杨酸的阴离子和蛋白质氨基酸阳离子结合,形成不溶性蛋白盐沉淀。 2.操作:,加尿液1ml,加磺硫酸2滴,1分钟内判断结果,同加热乙酸法,3.注意事项 本试验方法灵敏度高,极微浑
8、浊无意义。 判断结果需及时。 尿酸盐和尿酸过多,可出现假阳性。 尿内含碘造影剂、大剂量青霉素等可使反应呈假阳性。,(三)试带法,原理:pH指示剂的蛋白误差原理 试剂模块中含有酸碱指示剂溴酚蓝,pH阈值3.0(黄色)4.6(蓝紫色)。 pH3.2时,溴酚蓝产生阴离子,与带阳离子的蛋白质(清蛋白)结合形成复合物,发生颜色变化。从淡黄色变成绿色甚至是蓝色。 根据颜色变化可目测也可用尿液分析仪判读结果。,五、蛋白质定性检查参考值:阴性,1、加热醋酸法: (1)特异性强,干扰因素少,能同时检出A、G,但敏感性较低,一般在0.15g/L左右; (2)为蛋白定性确证实验。,六、蛋白质定性检查方法学评价,(3
9、)加热乙酸法干扰因素及控制:,尿液偏碱(pH9)或偏酸(pH3)时呈假阴性,故试验前应先将尿液pH值调至56. 尿液离子强度低(无盐或低盐饮食者)时,可呈假阴性。可在标本中滴加饱和NaCl溶液12滴后再进行试验。 尿中混有生殖系统分泌物时,可出现假阳性,故用中段尿或离心后取上清液检测。 加热加酸再加热后,立即判读结果。,2、磺基水杨酸法,(1)操作简单,反应灵敏、结果显示快,灵敏度可达0.050.1g/L。 (2) A、G、TH糖蛋白和本周氏蛋白均呈阳性发应; (3)适于蛋白尿筛选试验,为干化学法的参考方法。 (4)本法阴性可靠,阳性需进一步鉴别。,(5)磺基水杨酸法干扰因素及质量控制,尿液p
10、H值9或pH3时呈假阴性,故试验前应先将尿液pH值调至56. 大剂量青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、含碘造影剂时可出现假阳性。 尿中混有生殖系统分泌物时,可出现假阳性,故用中段尿或离心后取上清液检测。 判断结果应于1分钟内。,3.试带法,(1)本法快速、简便、易于标准化,可肉眼观察结果,也可用于尿液自动分析。 (2)对A敏感,对G不敏感,可漏检本周氏蛋白。 (3)适于健康普查或临床筛检,不适用于肾病疗效观察及预后判断和泌尿系统其他疾病的筛选。,(4)试带法干扰因素和质量控制,pH影响:pH9时,呈假阳性;pH3时,呈假阴性。故试验前应先将尿液pH值调至56. 食物因素:检验前一天宜均衡饮食。 药物
11、因素:假阳性:奎宁、嘧啶或尿中含磷酸盐、季胺盐等。假阴性:青霉素、庆大霉素、磺胺、含碘造影剂。 操作:试带浸渍时间过长,假阳性;过短或太长以至模块中试剂消失,假阴性。,小结:一些干扰因素的影响,加热乙酸法 磺基水杨酸法 试带法 pH9 假阴性 假阴性 假阳性 pH3 假阴性 假阴性 假阴性 青霉素 假阳性 假阴性,七、临床意义,1、生理性蛋白尿 定性试验:不超过;定量试验:小于0。5g/L (1)功能性蛋白尿: (4)偶然性蛋白尿: (2)直立性蛋白尿: (5)老年性蛋白尿: (3)摄入性蛋白尿: (6)妊娠性蛋白尿:,2.病理性蛋白尿,(1)肾前性蛋白尿:浆细胞病;血管内溶血;大面积肌肉损伤
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- 尿液 蛋白质 葡萄糖 酮体 检测
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