杂交瘤技术实验原理及其操作演示.ppt
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1、杂交瘤技术的实验原理及其操作演示,演示实验(一),接受抗原刺激后,能分泌针对该抗原的特异性抗体,在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞,通常不再进行细胞分裂,存活一段时间后便会死亡短命细胞,一、杂交瘤技术产生的3个技术关键,1. B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性:,B淋巴细胞(B lymphocytes):,骨髓瘤细胞 (myeloma cells):,恶性增殖的转化细胞,只要营养条件适合可永远分裂和存活长命细胞。 经筛选与驯化,现已建立多种骨髓瘤细胞株没有抗体分泌物。,2. 细胞融合技术:,长命 不分泌抗体,分泌抗体 短命,分泌抗体 长命,Khler和Milstein, 1
2、975,1984年Nobel医学奖,3. 杂交瘤细胞的筛选 :,HAT培养基筛选,H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶,A,(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase) 次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 ( HGPRT ),胸腺嘧啶激酶 ( TK ) (Thymidine kinase),B淋巴细胞: HGPRT+, TK+,骨髓瘤细胞: HGPRT-, TK-,存活,死亡,外源性途径(旁路途径),二、杂交瘤技术的操作流程,1. 动物免疫:,目的: 在细胞融合后获得尽可能多的分泌针对于该目标抗原的特异性抗体的杂交瘤细胞.,特定目标抗
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- 杂交瘤 技术 实验 原理 及其 操作 演示
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