免疫组织化学染色sp技术.ppt
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1、武汉大学病理教研室,免疫组织化学技术的定义,免疫组织化学技术(Immunohistochemistry, IHC)是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内的抗原(或抗体)的分布进行定位、定性、定量检测,经过组织化学呈色反应在组织原位显示抗原(或抗体),如各种蛋白质、多肽、磷脂和多糖等成分的一门新技术。,武汉大学病理教研室,免疫组织化学的应用,IHC通过检测细胞内、细胞表面或细胞间的正常或异常的物质,以研究组织细胞的正常生理、代谢及疾病的病因、发病机理,广泛用于各种蛋白质或肽类物质表达水平的检测,细胞属性的判定、淋巴细胞的免疫表型分析、细胞增殖和凋亡的研究,以及细胞周期和信号转导的研究等。,武汉大
2、学病理教研室,实验名称,链霉菌亲和素-过氧化物酶连结法 (Streptavidin-Peroxidase Conjugated Method, 简称S-P法) 检测胃癌组织CKVimentin的蛋白表达,武汉大学病理教研室,S-P法原理示意图,过氧化物酶,链酶亲和素,生物素,生物素化二抗,特异性一抗,待测抗原,武汉大学病理教研室,免疫组织化学基本实验流程,武汉大学病理教研室,具体步骤如下: 1石蜡切片二甲苯脱蜡,梯度酒精水化,以0.01M PBS(pH 7.4)漂洗35min; 2所有组织均采用微波修复抗原; 3室温冷却后,0.01M PBS(pH 7.4)漂洗35min; 4滴加50l过氧化
3、物酶阻断液(试剂A),37湿盒孵育 10min; 50.01M PBS(pH 7.4)漂洗35min; 6滴加非免疫性动物血清(试剂B),37湿盒孵育 10min;,武汉大学病理教研室,7甩去多余血清,分别滴加种抗体,4湿盒孵育 过夜,0.01M PBS(pH 7.4)漂洗35min; 8滴加生物素标记的二抗(试剂C),37湿盒孵育 15min,0.01M PBS(pH 7.4)漂洗35min; 9滴加链亲和素-过氧化物酶溶液(试剂D),37湿盒孵育 15min,甩去多余液体; 10每片滴加新鲜配制的二甲基联苯胺(DAB)显色液,光镜下控制反应时间(约为1-5min),自来水充分冲洗,苏木素复
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