噬菌体效价的测定.ppt
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1、实 验 九 噬菌体效价的测定,目的要求,1、掌握噬菌体效价测定的原理及方法 2、观察噬菌斑的形态,实 验 内 容 一 培养基和实验物品的准备,本次实验准备工作(2人/组),1、配制牛肉膏蛋白胨液体培养液( pH 7.4-7.6 ); (已准备好)。 2、测定效价时稀释用9ml牛肉膏蛋白胨液体培养液 2支/组,分装于18180mm试管; 3、牛肉膏蛋白胨固体培养基(2%的琼脂)底层用,150ml/组,装于250ml三角瓶, (用于制备9个无菌平板,倒薄一点) 4、上层用5ml牛肉膏蛋白胨半固体培养基(0.8 %的琼脂),融化后分装于15150mm试管中加塞包扎灭菌,10支/组;(上周已准备好)。
2、 5、1ml无菌吸管 4支/组。,实 验 内 容 二 噬菌体知识介绍,一、几个重要概念,1、噬菌体: 是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,分布极广,个体很小,在光学显微镜下看不见,需用电镜观察。 不同的噬菌体在电镜下有三种形态:蝌蚪形、微球形和丝形。大多数噬菌体呈蝌蚪形,由头部和尾部两部分组成。,2、噬菌斑: 在混浊的细菌菌面(菌苔)上形成的透明区域,是由噬菌体不断侵染宿主细胞裂解形成的,其形状、大小不等。 3、噬菌体效价: 指1mL样品中所含具有侵染活性的噬菌体(烈性噬菌体)数量噬菌斑形成单位(pfu,plaque-forming unit)。 效价(titre,titer)这一
3、名词在不同的场合有其不同的含义(如抗生素等)。,二、病毒粒子的构造(模型),噬菌体的形态及分类科属,大肠杆菌T4噬菌体结构示意图,大肠杆菌T4噬菌体结构示意图 及电镜照片,头部,六角形基板,领环,螺旋形尾鞘,核心或管(中空),尾刺或刺突,尾丝,噬菌斑示意照片,宿主细菌菌苔,噬菌斑,大肠杆菌T噬菌斑的表型形态,三、噬菌体的分类 根据噬菌体与宿主菌的相互关系,烈性噬菌体(virulent phage) 能在宿主细胞内复制增殖,产生许多子代噬菌体,并最终裂解细菌。 温和噬菌体(temperate phage) 噬菌体基因与宿主染色体整合,不产生子代噬菌体,但噬菌体DNA能随细菌DNA复制,并随细菌的
4、分裂而传代,存在游离态、整合态、营养态三种形式。 针对温和噬菌体来说:前(原)噬菌体、溶源菌,四、噬菌体繁殖(生活周期),1、吸附 2、侵入 3、增殖(生物合成) 4、成熟装配 5、裂解释放,T4噬菌体吸附和DNA的注入,T偶数噬菌体感染大肠杆菌 的扫描电镜照片,T4噬菌体的生活周期,T4噬菌体的装配,五、噬菌体的应用,1、细菌的鉴定与分型 噬菌体与宿主菌的关系具有高度特异性,即一种噬菌体只能裂解一种和它相应的细菌,故可用于未知细菌的鉴定和分型。 2、遗传学及分子生物学研究的重要工具 噬菌体基因数量少,结构比细菌和高等细胞简单得多,且易获得大量的突变体构建基因文库(噬菌体);基因工程载体;噬菌
5、体展示技术。,3、细菌感染的诊断与治疗 利用其专一性,可以诊断和治疗一些相关细菌感染性疾病(用于治疗时,其分泌的细菌素也可以应用,临床外伤治疗已有应用) 但专一性也限制了噬菌体在临床上的广泛应用(人们最需要的是广谱性)。,六、噬菌体的危害,在工业上会造成所培养菌体的大量裂解,使生产难以完成。 表现形式:发酵周期明显延长;碳源消耗缓慢;发酵液变清,镜检时,有大量异常菌体出现;发酵产物的形成缓慢或根本不形成;用敏感菌作平板检查时,出现大量噬菌斑;用电子显微镜观察时,可见到有无数噬菌体粒子存在。 轻则延长发酵周期、影响产品的产量和质量,重则引起倒罐甚至使工厂被迫停产。,七、以防为主的措施:,1、决不
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