天然药物提取工艺课件----氨基酸和蛋白质提取工艺.ppt
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1、第五章 氨基酸和蛋白质提取工艺,基本要求,了解氨基酸和蛋白质的理化性质和 分类,以及各种生理活性; 掌握蛋白质的提取工艺。,第一节 概述,一、蛋白质的理化性质 1. 蛋白质的胶体性质 分子量:1万百万之间; 分子大小:已达到胶粒1-100nm范围之内; 亲水性:球状蛋白质的表面多亲水基团,具强烈的吸引水分子作用;表面形成一水化膜;阻止蛋白质颗粒的相互聚集。 扩散速度慢,不易透过半透膜,黏度大。,2.蛋白质的等电点 蛋白质由各种氨基酸组成 不同的等电点:所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸 的数目不同,有各自等电点。 等电点偏碱性:含碱性氨基酸数目较多;组蛋白 等电点偏酸性:含酸性氨基酸数目较多; 人体
2、体液中许多蛋白质的等电点为PH5.0左右, 所以在体内以负离子形式存在。,3.蛋白质的变性 (次级键、二硫键的破坏) 变性蛋白质和天然蛋白质最明显的差别: 溶解度降低, 同时蛋白质的黏度增加, 结晶性破坏, 生物活性丧失, 易被蛋白酶分解,3.蛋白质的变性 引起蛋白质变性的原因:(物理和化学) 物理因素:加热、加压、脱水、搅拌、振荡、 紫外线照射、超声波等; 化学因素:强酸、强碱、尿素、重金属盐等 在临床医学上,变性因素常常被应用于消毒及灭菌。 注意防止蛋白质变性就能有效保存蛋白质制剂,3.蛋白质的变性 可逆变性:当变性程度较轻时,如去除变性因素,有些蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能
3、,称为复性 不可逆变性:许多蛋白质变性时被严重破坏,不能恢复。,4.蛋白质的沉淀 蛋白质沉淀:蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象。 变性蛋白质一般易于沉淀, 但也可不变性而使蛋白质沉淀。 如何聚集? 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层和电荷 若无外加条件,不致互相凝集; 去除这两个稳定因素(如pH调节等),蛋白质便容易凝集析出,引起蛋白质沉淀的方法: a.盐析 加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出。 常用的盐:硫酸铵,硫酸钠,氯化钠等。 各种蛋白质盐析时所需的盐浓度和pH不同,故可用于对混合蛋白质组分的分离。,b.重金属盐沉淀蛋白质: 蛋白质可与重金属H
4、g、Pb等结合成盐沉淀 沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜,此时蛋白质分子有较多的负离子可与金属成盐。 重金属沉淀的蛋白质常是变性的,但若在低温条件下,并控制重金属离子浓度,也可用于分离制备不变性的蛋白质 临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的性质,抢救误服重金属盐中毒的病人。,c.生物碱试剂以及某些酸类沉淀蛋白质: 蛋白质可与生物碱试剂(苦味酸、鞣酸)以及某些酸(三氯乙酸、硝酸等)结合成不溶性的盐沉淀; 沉淀的条件为pH小于等电点,此时蛋白质带正电荷易与酸根负离子结合成盐; 临床血液分析时,常用此原理去除血液中的蛋白质 此类沉淀反应还可用于检查尿液中蛋白质,d.有机溶剂沉淀蛋白质: 可与水混合的有
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