人教版教学课件[名校联盟]福建省三明市泰宁一中生物选修三22《动物细胞工程》课件2.ppt
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1、,如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交,得到绿色的小奶牛,那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗?,动物细胞也能融合吗?,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,动物细胞融合与单克隆抗体,三、动物细胞融合,1、概念:也称细胞杂交。是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。,思考题,1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁?,酶解法,如纤维素酶或果胶酶,2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?,无需,因为动物细胞无细胞壁,3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些?,离心、电激等物理方法;PEG等化
2、学方法,4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还有其他方法吗?,能 还可以利用灭活的病毒进行诱导,5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 成完整的杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?,不能,细胞A,细胞B,杂交细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒,有丝分裂,动物细胞融合,灭活病毒诱导细胞融合的原理:,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏这些病原体的抗原结构。,用灭活的病毒
3、诱导动物细胞融合过程,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,植物体细胞杂交,去壁,融合,组培,物理法,化学法,生物法: 灭活的病毒,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,主要用途,物理、化学方法,(同左),灭活的病毒,物理(离心、振动、电刺激),化学(聚乙二醇),诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,细胞融合的原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较,思考: 1.抗体是由何种细胞产生的? 效应B细胞(浆
4、细胞)。 2.一个淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗? 每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。,四、单克隆抗体,提出问题:长期以来,人们为了获得抗体,采用的是把某种抗原反复注射到动物体内,然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体,不仅产量低,而且抗体的特异性差,纯度低,反应不够灵敏。,3.一种抗原侵入机体之后,引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗? 动物在免疫反应过程中,体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。 4. 简述获得抗体的传统途径? 抗原 动物体 抗体,刺激,浆细胞,6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体 体外培养单个淋巴细胞,提取分泌的抗体,5.这种方法获得的抗
5、体有什么缺陷? 产量低,纯度低,特异性差,7、体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题? 8、请概括单克隆抗体的概念 9、根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案,思考实验过程与原理?,1.概括单克隆抗体的概念,实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理: 实验材料:小白鼠 实验器材:培养皿、针筒等等。 实验过程:?,2.根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案,回答下列问题:,B淋巴细胞能产生抗体,骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。,(1)设计方案: 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞能够无限增殖,杂种细胞,(2)制备过
6、程:,(1)为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?,思考:,(2)单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段?,(3)制备过程为何要经过两次筛选?,1、因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力,而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领,所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞,能够在体外大量繁殖,并且产生特定的单克隆抗体。,3、拓展:聚乙二醇处理后,培养液中存在哪几种细胞?,脾-脾 脾-瘤 瘤-瘤 未融合的脾细胞 未融合的瘤细胞,2、动物细胞融合、细胞培养,已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断,人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增
7、殖。鼠骨髓瘤细胞尽管没有S途径,但能不断分裂增殖,将这两种细胞在试管中混合,加聚乙二醇促融,获得杂交瘤细胞,请回答: (1)试管中除融合的杂交瘤细胞外,还有_种融合细胞。(考虑两两融合) (2)设计一方法(不考虑机械方法),从培养液中分离出杂交瘤细胞,并说明原理。 方法: 原理:,试试身手,解析: (1)试管中有人的淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞,在促溶剂的作用下,可能出现以下3种细胞的融合情况,人的淋巴细胞和淋巴细胞融合,小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合,人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合,实验需要的是第3种细胞,即杂交瘤细胞; (2)要将杂交瘤细胞分离出来,可以在培养液中加入氨基嘌呤,收集增殖的
8、细胞;加入氨基嘌呤后,使D合成途径阻断,仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖,但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。,某同学根据杂交瘤技术的方法,设计了一个生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答: ()该方案能达到预期效果吗? ()图中为 过程,常用 作为诱导剂。该细胞继承了 因此不仅能分泌 ,还 有 的本领。,不能,细胞融合,特异性抗体,在体外培养条件下大量增殖,试一试,单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是 ( ) B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细
9、胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,A,3.单克隆抗体的应用:,在基础理论研究中具有重要意义,在疾病诊断、治疗和预防方面,具有,生物导弹,特异性强、灵敏度高 等优越性。,用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”,灵敏度很高,在妊娠第8天就可以做出诊断,比原来的诊断方法提前了10天左右,可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90以上。,总结,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法 灭活的病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性
10、强、灵敏度高的优势,教学反馈,1.动物细胞融合技术最重要的用途是 ( ) A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞,B,2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 ( ) A.B淋巴细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞,D,3.(多选)1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是 ( ) A.效应B细胞 BT淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞,A B C D,4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,不能,没有将抗原注入小鼠体内,无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞
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