第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术.ppt
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1、第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术,第一节 免疫细胞的分离 一、 外周血单个核细胞分离 二、 淋巴细胞的分离 三、 T细胞和B细胞的分离 四、 T细胞亚群的分离,第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、 细胞表面标志及亚群 二、 B细胞表面标志 三、 NK细胞表面标志 第三节 其他的免疫细胞 第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用 一、 免疫细胞表面标志的检测方法 二、 淋巴细胞表面标志检测的临床意义,思考题 小结,第一节 免疫细胞的分离,外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离,一、外周血单个核细胞分离,外周血单个核细胞(peripheral mono
2、nuclear cells, PMNC)包括淋巴细胞和单核细胞(monocyte)。 Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞,是一种单次差速密度梯度离心的分离法。,细胞分离基本原理,不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同,不同细胞密度不同,人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度为1.075-1.090,不同细胞密度不同,用1.0770.001的分层液可将细胞分离,密度梯度离心(Ficoll)离心,二 、淋巴细胞分离,贴壁粘附法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法 Percoll 分离液法 (连续密度梯度离心
3、),(去单核细胞),E花环沉降法 尼龙毛柱分离法,三、T细胞和B细胞的分离,四、T细胞亚群的分离,亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激活细胞分离仪分离法,荧光激活细胞分离仪分离法,磁珠大小可以选择,大小免疫磁珠分离细胞的特点比较,免疫磁珠法细胞分选过程,免 疫 磁 珠 细 胞 分 选 装 置,全自动细胞分选系统,流式细胞分析仪,第二节 淋巴细胞标志及亚群分类,常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原(Cluster of differentiation,CD)。,细胞表面分化抗原(CD抗原),适用于T、B细胞的分离 已知CD抗原细胞亚群的分离 未知CD抗原细胞亚群的分离 (阴性分选),
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