细菌细胞观察刘佩珊.ppt
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1、細菌細胞觀察 劉佩珊,口腔中微生物菌叢之觀察,在口腔中唾液含有水分、胺基酸、蛋白質、脂質、醣類及一些無機物,因此適合菌體生長。 牙齒表面亦會有大量菌體存在形成牙菌斑。 主要菌群為厭氣性螺旋體與弧菌、葡萄球菌、乳酸桿菌及鏈球菌 乳酸桿菌及鏈球菌附著於齒面上,可醱酵醣類產生乳酸,造成牙齒脫鈣作用,進而形成細微穿孔導致齵齒。 本實驗以牙籤採集口腔及牙齒面檢體,並藉由簡單的染色來觀察口腔中的細菌。,蓋玻片一端滴加一滴methylene blue染劑(圖D) 以吸水紙由另一端將水吸出(圖E),口腔中微生物菌叢之觀察,鼻腔中金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus)之鑑定,天然存在人體的微
2、生物稱為正常菌群 在鼻腔中主要菌群為金黃葡萄球菌及表皮葡萄球菌 MSA含高濃度鹽類,可抑制葡萄球菌屬以外之微生物生長 MSA含甘露醇(mannitol),經醱酵產酸後,可經由酚紅(phenol red)顯示pH值之改變 金黃葡萄球菌能醱酵甘露醇,使菌落周圍呈黃色,表皮葡萄球菌不醱酵甘露醇,顏色不改變。,以無菌棉棒伸進鼻孔約2.5公分,輕輕旋轉棉棒使之與鼻孔黏膜接觸。 壓舌板壓住舌頭,以無菌棉棒於咽喉表面充分旋轉,採集檢體。勿觸及舌頭。 將採樣的棉棒直接以鋸齒狀劃線接種於MSA plate上。,表皮葡萄球菌,大腸桿菌,鏈球菌,金黃葡萄球菌,細菌簡單染色,染劑( Stains ),鹼性染劑 正電荷
3、染色原 甲烯藍、結晶紫、石炭酸複紅 酸性染劑 負電荷染色原 伊紅、苯胺黑,簡單染色( Simple stains ),使用單一染劑 使用鹼性染劑(正電荷) 觀察細菌形狀(球狀、桿狀、螺旋狀)、大小、排列情形(成鏈、成簇、成對、四聯) 甲烯藍(1-2分鐘)、結晶紫(20-60秒)、石炭酸複紅(15-30秒),製備染色抹片,準備乾淨之載玻片 自肉湯培養或固體培養製備抹片 熱固定 過火數次或浸泡於甲醇中一分鐘,簡單染色步驟,將菌製備成抹片,各抹片於染色前需先經過熱固定。 將玻片置於染色盤上,覆以染色液,並注意適宜之染色時間。 以蒸餾水尖嘴瓶小心沖去過剩染色液,此時玻片應與水流成平行,如此可減少微生物自抹片中流失。 以吸水紙吸乾抹片,切勿揩拭。 以油鏡觀察抹片。,簡單染色 B.cereus,簡單染色 S. aureus,
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