白血病淋巴瘤免疫分型.ppt
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1、1,白血病/淋巴瘤免疫分型 苏州大学附属第一医院 江苏省血液研究所 卫生部 血栓与止血重点实验室 朱明清 2010年8 月 杭州,2,流式细胞术的基本概念,流式细胞术(Flow Cytometry, 简称FCM)是一种可以快速、准确、客观,并且同时检测单个微粒(通常是细胞)的多项特性的技术,同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒,如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征,并加以定量,3,散射光信号和荧光信号,前向角散射光(FSC, Forward Scatter) 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积 侧向角散射光(SSC, Side Sc
2、atter) 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性 荧光素与特异抗体结合,荧光抗体与细胞抗原结合越多,产生的荧光信号越强。,4,CD45/SS示意图,5,实验对照的设计,空白对照:ALL 阴性对照:常用同型抗体对照 单色分析:设同型抗体对照 多色分析:同型对照,单阳性对照(用于仪器校正) 阳性对照:检测阴性时,6,空白对照和阴性对照的比较:,7,需要用多少的标志来确证感兴趣的细胞群? 它们在细胞上的分布是不是很近? 它们是否在不同的细胞上表达不同? 他们表达强还是弱?,抗原表达,CD3,CD4,8,抗原分布,表面,胞浆,核内 是共同检测还是分别检测?,CD3,4,8, tet
3、ramer + Cytokines,CD3,4,8, tetramer + DNA,Cytokines + DNA,CD3,4,8, tetramer + Cytokines + DNA,9,设门,08-03307,10,设门,全部 细胞,门内细胞,08-03307,11,12,13,血液肿瘤分类进程,14,目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献,15,白血病免疫分型的理论基础,白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞,但仍能表达正常血细胞所具有的抗原,因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞
4、,必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式,才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。,16,细胞类型鉴定,Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40. Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280,17,CD45/SS示意图,正常骨髓细胞 血液肿瘤细胞 老化粒细胞 、噬酸细胞 早幼成熟粒细胞 M3、CML 单核细胞 M4、M5 LGL 淋巴细胞 CLL、ALL、CLD 正常前体细胞 M0、M1、M2、 嗜碱性粒细胞 M4、M5、ALL 成熟红细胞、血小板 M6、M7、MM 细
5、胞碎片 Pre-B-ALL 非血液来源细胞,18,B淋巴细胞分化与抗原表达关系图,Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine,19,T淋巴细胞分化与抗原表达关系图,Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine,20,粒细胞分化与抗原表达关系图,Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine,21,单核细胞分化与抗原表达关系图,Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medici
6、ne,22,非肿瘤T淋巴细胞表型,23,非肿瘤B淋巴细胞表型,24,非肿瘤粒细胞、单核细胞表型,25,非肿瘤粒细胞、单核细胞表型,26,白血病免疫分型,根据白血病细胞表达的系列相关抗原,确定其系列来源。如:淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。 根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如:早前B,前B,普通B,27,EGIL,1998年白血病积分系统,分值 B系 T系 髓系 2 CD79a CD3 MPO (cyt)CD22 TCR/ (cyt)IgM TCR/ 1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 TdT
7、 TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 *当髓系和一个淋系积分均2分时,则诊断为急性混合细胞型白血病。,28,急性白血病的四大免疫类型,单表型急性白血病 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 双表型/双克隆急性白血病 未分化型急性白血病,29,初治急白分型,Acute Leukemia Blasts Present 20%,红系和巨核系的鉴定需要另外增加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61,30,AML-M1,31,AML-M1,32,AML-M2,33,AML-M2,34,AML-M3,35,AML-M4,36,AML-M4,37,AML-M5,38
8、,AML-M6,39,初治急淋分型,Common Thymocyte,Mature Thymocyte,CD2+ CD5+ Dual CD4+/CD8+ sCD3-,CD2+ CD5+ CD4+ or CD8+ sCD3+,CD2-/+ CD5-/+ sCD3- CD4- CD8-,TdT+ CD10- clg- sig-,Pre-B,CD10+ cig+ TdT+ sig-,B,sig+ CD10+/- clg+/- TdT-,Common,TdT+ CD10+ clg- sig-,Early Thymocyte,Early B- Precursor,40,B细胞系ALL的免疫分型 亚型 C
9、D19 CD20 HLA-DR CD10 CyIg SmIg FAB分型 早前B-ALL + + L1,L2 前 B-ALL + /+ + + + L1 普通B-ALL + +/ + + L1,L2 成熟B-ALL + + + +/ /+ + L3,41,B-ALL,42,Pre-BALL,43,Common-B-ALL,44,T细胞系ALL的免疫分型 亚型 CD7 CD1a CD2 TdT FAB分型 早前T-ALL + + L1,L2 胸腺皮质T-ALL + + + + L1,L2 T-ALL + + + L1,L2,45,T-ALL,46,T-ALL,47,HAL(T/M双克隆),48,
10、49,白血病免疫分型的价值,确定ALL的细胞类型(B细胞或T细胞)和 ALL的分化阶段。 鉴定AML的特征。 对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型。 诊断一些少见类型的白血病。如:M6、M7、M0等。,50,诊断双表型/混合细胞型急性白血病。 鉴别诊断ALL伴有髓系抗原表达(My+)或AML伴有淋系抗原表达(Ly+)。 鉴别急性白血病与其他造血系统和非造血系统恶性肿瘤。 根据一些特殊的免疫表型特征诊断与某核型异常相关的亚型。如:M3/t(15;17); M2/t(8;21);M4Eo/inv(16)等。,51,淋巴瘤免疫分型,非何杰金淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma
11、)是淋巴系统的一类具有组织和生物学异质性的恶性克隆性疾病。世界卫生组织(WHO)结合形态学、免疫表型、基因分型、正常细胞组成及临床行为,新修订了欧美淋巴瘤分类系统(REAL分类)对淋巴系统肿瘤的分类。这种分类方法在观察者的组内及组间的重复率为85-95%。WHO淋巴瘤分类是建立在疾病病理形态、免疫表型、遗传学特征、临床特点的综合资料基础上:病理形态是分类的基础,大多数淋巴瘤仅靠病理形态就能做出明确诊断;免疫表型和遗传学特征是确定每一淋巴瘤的重要指标,是达成共识的客观依据,有助于提高诊断的可重复性,具有鉴别诊断和预后判断的辅助作用,但在淋巴瘤诊断中并非必不可少;临床特点,特别是肿瘤原发部位,如节
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