第25章病毒感染的检查方法与防治原则.ppt
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1、病毒感染的检查方法 与防治原则 中南大学湘雅医学院 姚孟晖 副教授,第25章,第一节 病毒感染的检查,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类:如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似,但应注意: 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存,尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,二、病毒的分离与鉴定,(一)病毒的分离培养 细胞培养(cell culture) 鸡胚接种(egg inoculation) 动物接种(animal inoculation),二、病毒的分离与鉴定,一般程序:,标本,无
2、菌处理,动物接种 鸡胚培养 细胞培养,指标阳性 指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,(一)病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养(monolayer cell culture) 分类 悬浮细胞培养(suspended cell culture) 原代细胞(primary cell) 细胞种类 二倍体细胞(diploid cell) 传代细胞系(continuous cell line),病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎 培养基,(原代细胞),单层细胞,(次代细胞),传代培养,蛋白酶,特
3、点:对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,(2)二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目,可用于病毒分离和疫苗生产。,特点:对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒,无致瘤潜能 可传50代左右,1.细胞培养,(3) 传代细胞培养,特点:对多种病毒敏感性高 繁殖能力高,传代时间长 有致癌危险,不能用于疫苗生产,1.细胞培养,2.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜(allantocherion) 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔(allantoic cavity) 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔
4、(amniotic cavity) 流感病毒的初次分离 卵黄囊(yolk sac) 嗜神经病毒,2、鸡胚培养,优点:易管理,不带微生物,成本较低 缺点:操作程序复杂,3.动物接种 应用:尚无敏感细胞的病毒培养 动物:兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点:结果易观察,可建立动物模型 缺点:有饲养条件要求,费用高,动物 体内常带有潜伏病毒,1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE ) 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等(多数病毒); 形成多核巨细胞或称融合细胞(麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等); 在培养细胞中形成包涵体(狂犬病病毒、麻疹病毒等)。,(二)病毒的
5、鉴定,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),形成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附(hemadsorption),病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,(3)干扰现象(interference),风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖,CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖,CPE()
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- 25 病毒感染 检查 方法 防治 原则
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