酶学分析技术.ppt
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1、1,酶学分析技术,2,酶的活性是指酶的催化能力的大小,即酶促反应速度的快慢。在规定条件下,单位时间内底物减少的量或产物生成的量来表示。,3,酶活性的单位是指在特定的条件下,使酶促反应达到某一速度所需要的酶量。,4,1.惯用单位 由方法的作者自己规定在某特定 条件下生成一定量的产物为一个单位。 2.国际单位(IU) 在规定的实验条件下,每分钟催 化1mol底物发生反应的酶量。 3.Katal 1 Katal是指在最适宜的条件下, 每秒钟催化1mol底物发生反应的酶量。,5,酶的比活性是指单位质量(mg)的蛋白质所具有某种酶的活性。 活性单位/mg蛋白 比活性是衡量酶纯度的一个指标。,6,酶活性单
2、位的计算,酶单位/升=,(A测- A对).V总.106,K.L. V标,规定保温时间,实际保温时间,7,酶促反应进程曲线,产物浓度,反应时间t,线性期(B),偏离线性期(c),8,Vm,S,Vm/2,Km,一级反应,混合级反应,零级反应,酶促反应底物动力学,9,Vmax S 米-孟氏方程式: V = Km + S,当酶促反应=1/2 Vmax时,Km值是酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度,单位是mmol/L。 Km值是酶的特征常数之一。,1. v = VS /Km + S,2.Km = S (V/v - 1),3. Km 在一定的底物、pH、温度下是一个常数 (种类及底物性质有关),4
3、.酶促反应亲和力1/Km,6.设计适宜的底物浓度10-20 Km,5.选择酶的最适底物,11,Km和Vmax的测定(双倒数法),1 Km+ S Km 1 1,=,=,v,Vmax S,Vmax S,.,+,Vmax,12,1,S,1,V,Vmax,1,斜率=,Vmax,Km,-Km,1,双倒数作图法,13,酶活性测定的方法,1.终点法(又称二点法、固定时间法) 酶促反应一定时间后(从t1到 t2 )终止酶促反应,然后测定产物生 成的量或底物消耗的量。,14,优点 酶促反应已终止,比色计无需恒温装置,不必考虑显色剂对酶的影响。 缺点 无法了解酶作用这段时间里反应是否外于线性期。,15,每隔一定时
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