酶组织化学概论.ppt
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1、酶组织化学概论,酶是一种具有催化活性的特殊蛋白质。人体的各种机能活动都与酶的活性有密切关系。 国际生物化学酶学委员会已登记的酶有2200多种。但当前组织化学技术所能显示的酶仅200多种。,酶组织化学是用组织化学的方法证明酶的存在,它的基础是组织化学,目的在于阐明组织细胞内的化学反应、功能及其生物学意义。,一、酶的分类 1.氧化还原酶 是催化氧化还原反应的酶。包括脱氢酶、氧化酶、过氧化物酶和加单氧酶。如苹果酸脱氢酶、黄嘌呤氧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶与羟化酶或混合功能氧化酶。,2.转移酶 即催化功能基团转移的酶。此大类可根据底物中被转移的基团性质分为8个亚类。其中第6亚类为转移含氮基基团的酶,如天
2、门冬酸转移酶。 3.水解酶 即催化水解反应的酶,称为水解酶。水解酶又可根据其与水解反应有关的键的类型进一步分为亚酶类,如酯酶、糖酶和肽酶。,4.裂解酶 又称裂合酶。促进一种化合物分成两种化合物,或由两种化合物合成一种化合物的酶类。它可使底物移去基团,如 H20、C02,并出现双键。此类酶的亚类比较多,一般表示分裂的基团,如其中第1亚类为裂解C-C基团的酶,如草酰乙酸脱羧酶;第2亚类是裂解C-O基团的酶,如脱羧酶等。,5.异构酶 催化同分异构体的相互转化。磷酸葡萄糖异构酶,磷酸丙糖异构酶等。 6.合成酶(又称连接酶) 系指能将两种物质合成为一种物质,并必须与ATP分解相偶联的酶。,二、光镜酶组织
3、化学证明法 1金属-金属盐法 金属盐法一般是指金、银、铜、铁、铝、钴等金属。金属、金属盐及其化合物都具有颜色,容易发生呈色反应。而且酶的分解产物和金属多半可以结合。因此,捕捉酶反应的分解产物,使其与金属结合,利用其呈色反应,再显现出酶反应的部位,就可以证明某种酶的存在。,酶作用于底物后生成的分解产物与底物孵育液中的金属离子相结合,直接沉着于酶的反应局部,然后使其显色。其反应式如下: Pb2+ (NH4)2S R-PO4Na2 + H2O ROH + PbHPO4 PbS 酶反应 显色,这种方法在底物溶液中的H+浓度为中胜或弱酸性,常常可利用易获得的硝酸铅或醋酸铅。因此,本法常被应用于酸性磷酸酶
4、和在中性附近起作用的磷酸酯酶类。通常称本法为硫化铅法。,证明碱性磷酸酶时,通过形成可见的黑色硫化钴,称为硫化钴法。 Ca2+ R-PO4Na2 + H2O ROH + CaHPO4 酶反应 Co2+ (NH4)2S CoHPO4 CoS 金属置换 显色,用这些金属盐法能够证明的酶多半是水解酶。其中有碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、脲酶、酯酶、硫酸酶、碳酸酐酶、胆碱酯酶等。此外,根据磷酸酶的理论,利用组织化学的鉴别法能证明的酶还有磷酰胺酶、5-核苷酸酶、ATP酶、葡萄糖-6-磷酸酶等。,2偶联偶氮色素法 偶联偶氮色素法,此法又称偶氮色素法,是指用人工合成的酶底物,在酶的作用下,产生分解产物,后者与重氮盐
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