张少敏03081028.ppt
《张少敏03081028.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《张少敏03081028.ppt(13页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、,张少敏 03081028,蛋白质含量的测定,目前常用的有四种古老的经典方法:定氮法,双缩脲法( Biuret法) Folin -酚试剂法( Lowry 法)和紫外吸收法.另外还有一种近十年才普遍使用起来的新测定方法,考马斯亮蓝法( Bradford法).其中Bradford 法和 Lowry 法灵敏度高,比紫外吸收法高10-20倍,比 Biuret 法高100倍以上.凯氏定氮法比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质.,下面只简单介绍凯氏定氮法和考马斯亮蓝法 一.微量凯氏定氮法 样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫氨.经强碱碱化使之分解放
2、出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液 被中和的程度可计算得样品氮的含量.以甘氨酸为例:,H2NCH2COOH +3H2SO4 2CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3 (l) (1) 2NH3 +H2SO4 (NH4)2SO4 (2) (NH4)SO4 +2NaOH 2H2O+Na2SO4 +2NH3 (3) 此法灵敏度低,适用于0.2-1.0mg 氮,误差为2%,费时8-10小时,将氮转化为氨,用酸吸收后滴定 .,二. 考马斯亮蓝法 1).原理 1976年由Bradford建立的考马斯亮蓝法,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法之一. 考马
3、斯亮蓝G-20染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料最大吸收峰位置,由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.染料主要是与蛋白质中碱性氨基酸和芳香氨基酸残基结合. 在595nm下测定的吸光度A595,与蛋白质浓度成正比.,Bradford 法的突出特点: (1)灵敏度高.其最低检测蛋白质含量可达1mg,这是因为蛋白质与染料相结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的吸光系数,因而光吸收要比Folin 酚试剂法大得多. (2)测定快速,简洁,只需要加一种试剂.完成一个样品的测定,只要5分钟左右 .由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 张少敏 03081028
链接地址:https://www.31doc.com/p-3380649.html