采样HAHI洗血配制培养液等步骤ppt课件.ppt
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1、1,采样、HA、HI、洗血、配制培养液等步骤,2,洗血,1ml 肝素可以抗凝 5.5ml血液,心脏抽取豚鼠血液2ml,在离心管里面加PBS至10ml,离心 3000rpm/ 5min,用塑料吸管弃上清,再加PBS至10ml,离心 1,3,离心 2,离心 3000rpm/ 5min,弃上清,加PBS至10ml,离心 4000rpm/ 10min,去上清,用塑料吸管将血细胞吸入玻璃瓶,加PBS稀释到0.6%,4%保存备用,4,采样,地点:汕头大学医学院附属第一医院儿科 时间:周一周五 上午9:00 11:00 发烧儿童体温高达37.7以上,在7天内出现疑似病毒感染的呼吸道症状,年龄0-18岁,经就
2、诊儿童父母同意采集鼻咽拭子,采完装入采样管,放入冰包,同时做好记录。,5,采样液配制,以100ml为例: 100ml MEM 10ml PS 1ml 制霉菌素,6,标本稀释液,100ml MEM 5ml PS(青链霉素),7,病毒稀释液,100ml MEM 200ul TPCK胰酶 1ml PS,8,细胞培养液,100ml MEM 10ml FBS 1ml PS,9,种标本,STUC附属第一医院采取流感症状发热儿童咽拭子,咽拭子在振荡器上面振荡,使棉签中的标本充分溶解于液体中,用移液枪取220ul样本稀释液加入到1ml离心管中,吸取275ul标本液加入该离心管中,振荡、在室温作用1-2小时后离
3、心:10000rpm/ 3min,10,用PBS将细胞培养管洗两遍,吸取420ul离心后的标本液加入细胞培养管,35吸附1-2h,加维持液后放入培养箱里,培养5d,每天观察CPE,阳性,阴性,冻存或者继续接种细胞,盲传,同时冻存,11,HA test,红细胞凝集实验,12,100ul virus,50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50,50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50,step1: add 50ul PBS in 2-12,step2: add 100ul virus in 1,step3: coubling dilution,tite
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