止痛消结汤对模型大鼠乳腺增生组织Bcl-2、Bax的表达影响及临床研究.pdf
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1、 中文摘要 目的:通过动物实验,检测止痛消结汤对 HMG 模型大鼠乳腺组织中 Bcl-2 及 Bax 表达水平的影响,探讨止痛消结汤治疗乳腺增生病的机理,为临床治疗提供 实验依据。通过临床治疗,观察止痛消结汤的疗效。 方法:动物实验(1)分组:将 70 只大鼠随机分为 7 组,10 只/组,分别为: 空白对照组、模型对照组、治疗 5 组(包括止痛消结汤高、中、低剂量组、止痛 消结汤防治组、乳癖消组) ,空白组常规饲养。 (2)造模:除空白对照组外的 60 只大鼠采用激素诱发方法制备乳腺增生病动物模型,造模 30 天后,随机选取 5 只,手术切取乳腺组织(均取第 2、3 对乳房中任 1 侧)进行
2、病理学检查,证实造 模成功,模型对照组造模完成后常规饲养。 (3)治疗:止痛消结汤高、中、低剂 量组、造模完成后分别给予止痛消结汤 4.64g 生药/kg、2.32g 生药/kg、1.16g 生药/kg, 止痛消结汤防治组从造模第 4d 开始给予止痛消结汤 2.32g 生药/kg, 乳 癖消组造模完成后给予乳癖消片混悬液含 1.15g 生药/kg。 (4)检测:观察各组大 鼠日常行为表现及乳房局部变化,30 天后,手术切取各组乳腺标本(均取第 2、3 对乳房中任 1 侧) , 采用组织学评分法评价各组的镜下表现, 采用免疫组化法检测 乳腺组织中 Bcl-2 和 bax 的表达水平。 临床观察:
3、 选取门诊 33 例乳腺增生病患者为观察对象, 运用止痛消结汤加减 进行辨证施治,隔月随访,观察使用止痛消结汤治疗该病后临床症状是否好转及 其好转程度。 结果:动物实验 肉眼观察:造模后,造模组大鼠乳头明显高起、肿大、毛细血管扩张明显, 乳房触之皮温高,质地中等,敏感度增高明显;空白对照组无明显变化。 组织病理表现:模型组大鼠的乳腺组织可见不同程度腺体小叶增生、腺泡增 生,腺泡和末梢小导管扩张,有分泌物,大导管扩张,上皮或有呈高柱状突起等 乳腺增生病的病理改变。空白对照组标本可见正常腺体生理结构。 进行免疫组化染色后,对数据进行分析:与空白对照组比较,模型组乳腺组 织中 Bcl-2 和 Bax
4、 的表达水平升高,两组间有差异(P0.05) ;经过药物治疗后, 显示止痛消结汤防治组与高剂量组的 Bcl-2/Bax 值较低(P0.05) 。 临床观察:止痛消结汤加减治疗乳腺增生病 33 例,治愈 4 例,显效 11 例, 有效共占 16 例,无效 2 例。治疗总有效率 93.9%。 结论:1.止痛消结汤中、高剂量组和防治组对 HMG 大鼠的治疗效果优于乳癖 消片。 2.Bcl-2 和 Bax 在空白组大鼠乳腺组织 B 淋巴细胞中呈弱阳性或阴性表达, 在模型组皮损中呈强阳性表达。乳腺增生病的发生与细胞凋亡调节机制的失衡有 关。 3.止痛消结汤可提高大鼠乳腺增生组织中 Bax 的表达水平,对
5、 Bcl-2 的表达 水平影响不明显, 但可使增生组织的 Bcl-2/Bax 水平降低, 其疗效优于乳癖消片。 据此推测该方对乳腺增生病的治疗机制与细胞凋亡机制有关。 4.止痛消结汤治疗乳腺增生病临床疗效满意。 关键词:乳腺增生;止痛消结汤;动物实验;Bcl-2;Bcl-2 相关蛋白 Bax; 临床观察 Zhitongxiaojie Decoction on Hyperplasia of Mammary Glands in Model Rats of Bcl-2、 Bax Expression and Clinical Research Abstract AimAim To test the
6、effects of Zhitongxiaojie decoction on the breast tissue B-cell lymphoma/lewkmia-2 (Bcl-2) and Bcl-2 associated X protein (Bax) in rats with breast hyperplasia and to provide the experimental evidence for the clinical solutions to breast hyperplasia. To test the effects of Zhitongxiaojie decoction o
7、n clinical. MethodsMethods SPF level 70 female SD rats were randomly divided into blank group,model control group, therapy groups confirmed, Zhitongxiaojie decoction large, medium, small-dose group and protection after 21 days of model ,drug therapy, Zhitongxiaojie decoction groups were given oral d
8、oses of Zhitongxiaojie decoction suspension 4.64, 2.32 and 1.16g crude drug / kg. Positive control group administered RG RG suspension 1.15 g crude drug / kg. Blank group and model control group, no treatment, 30 days for delivery. Dose at the end of the experiment after 24 hours. intraperitoneally
9、10% chloral hydrate (0.4ml/100g)was injectioned to anesthetize the rat for tissue taking from breast.The levels of tissue Bcl-2 and Bax were measured. Clinical observation Ingredient-modified Zhitongxiaojie decoction for HMG in 33 cases, follow-up every 2 months after therapy ,as well as feedback if
10、 the decoction is an effective and how much better than before. ResultsResults Visual inspection Modulen rat nipples clearly marked rise, but no significant change in blank group. Pathological manifestations Model control group is visible to varying degrees of rats hyperplasia of mammary gland.Blank
11、 group sample normal gland physiology. Immunohistochemical staining and an analysis of the data Comparison with blank group, model group Bax expression levels lower, there are differences between the two groups (P0.05);After drug therapy, shows Zhitongxiaojie decoction in high-dose and pt-group of B
12、cl-2/Bax values are lower than other groups (P0.05). Clinical observation Ingredient-modified Zhitongxiaojie decoction for HMG in 33 cases,4 cases were cured,11cases were markedly effective,16 cases were effective, only 2 cases were ineffective, the total effective rate being 93.9%. ConclusionsConcl
13、usions: 1.Bax is weak positive in lesions of model group, different from that in blank group strongly positive. Mammary hyperplasia associated with imbalance in apoptosis regulation mechanism. 2.Zhitongxiaojie decoction raises the level of expression of Bax,had no influence to Bcl-2, keeping hyperpl
14、asia of the Bcl-2/Bax low level, more effective than rupixiao tablets.Thus speculated that the mechanism of decoction on treatment of hyperplasia of mammary gland and cell apoptosis mechanism. 3.Zhitongxiaojie decoction got satisfied clinical efficacy. Key words:Key words: H Hyperplasia of mammary g
15、landsyperplasia of mammary glands; ;Zhitongxiaojie decoction;Zhitongxiaojie decoction; Animal experiments;Animal experiments; BclBcl- -2 2;B Baxax;Clinical observationClinical observation Author:lin juanAuthor:lin juan Tutor:Cai guoliangTutor:Cai guoliang 目 录 引 言 1 一、文献研究 . 3 1.中医对乳腺增生病的研究情况 . 3 1.1
16、 概念范畴 . 3 1.2 关于乳腺增生病主症的认识 . 3 1.3 关于乳腺增生病病因病机的认识 . 4 1.4 中医对乳腺增生病的治疗方法研究进展 . 5 1.5 治疗问题的思考 . 8 1.6 未病学理论研究背景与乳腺增生病中的防治运用 . 9 2.西医对乳腺增生病的研究情况 11 2.1 病名及诊断依据 11 2.2 流行病学调查研究概述 11 2.3 病理学表现与发病机制 11 2.4 乳腺增生病与乳腺癌的关系研究 13 2.5 细胞凋亡与乳腺增生 13 2.6 乳腺增生病的西医治疗进展 18 二、实验研究 20 1.实验材料 20 1.1 实验动物 20 1.2 实验用药 20 1
17、.3 实验试剂 20 1.4 实验仪器 21 2.实验方法 21 2.1 模型制备及分组 21 2.2 药物及制备 21 2.3 治疗给药方法 22 2.4 指标观察及检测方法 22 2.5 结果判断 24 3.统计学处理 25 4.实验结果 25 4.1 一般情况 25 4.2 止痛消结汤对 HMG 大鼠乳腺组织镜下形态改变的观察结果,见表 2 . 25 4.3 各组大鼠乳腺增生组织中 Bcl-2、Bax 的表达情况及 Bcl-2/Bax 的变化。 . 26 5.结论 28 三 、临床观察 . 28 1.临床资料 28 1.1 病例来源 28 1.2 一般情况 28 2.病例选择标准 29
18、2.1 中医诊断及辨证分型标准 29 2.2 纳入选择标准 29 2.3 病例排除标准 30 3.治疗方案 30 4.观察指标与方法 30 5.疗效评价标准 30 6.统计学方法评估 31 7.结果 31 8.讨论 31 8.1 关于动物实验结果的进一步说明 31 8.2 关于临床观察的说明 32 8.3 止痛消结汤方药组成分析 32 8.4 止痛消结汤方药的现代药理研究 32 8.5 存在的不足 37 结 语 38 参考文献 39 附 录42 致 谢49 止痛消结汤对模型大鼠乳腺增生组织 Bcl-2、Bax 的表达影响及临床研究 1 引引 言言 乳腺增生病是中医外科常见的非炎症非肿瘤性质的疾
19、病,关于本病病因病机 尚在深入研讨中,本病具有“乳痛、乳房肿块及上述症状有随月经周期变化反复 发作”的典型症状,病理检查可见增生的导管及小叶等。发病率在育龄期妇女中 占 75%,多数研究报道将其中的囊性增生列为非典型增生或癌前病变,而调查显 示 180%左右妇女对乳腺增生不能做到正确认识,在前来就诊的患者中引起一些 不必要的恐惧。广州的一项最新统计结果显示 2该病发病率为 23.77%,排在宫颈 炎后,居职业妇女病的第二位。内蒙古巴彦淖尔市 2012 年的普查结果显示 3该病 发病率达 39.40%,在妇女病中居首位。太原某高校中的女教职工发病率 60.36%, 对 2006 年2011 年体
20、检结果的统计分析显示 4该校乳腺增生病发病率呈逐年上 升的趋势,并占据常见病的首位。横、纵向的研究可归结得:乳腺增生病正以较 高的发病率居于榜首,该病轻则带来精神负担,成为身心隐患,重则影响正常的 工作和生活。因而,引起现代人的极大关注。 西医治疗通常采用内分泌治疗、 维生素辅助治疗等, 同时存在治疗副反应大、 疗效不稳定等问题 5。本病类似于中医“乳癖” ,中医综合疗法在临床中治疗本病 特色鲜明:一是可充分发挥辨证论治的个体化治疗优势;二是注重整体观念主导 形成了丰富的传统疗法宝库,如针药联合、内外兼治、中药人工周期,治未病研 究与实践,等等,对于进一步完善该病种的现代综合防治方案,增强中医
21、药临床 适应能力提供了典范,颇值得专门研究。止痛消结汤是本院中医外科治疗乳腺增 生病的临床经验方,并经过系列科研证实,该方对乳腺增生病具有疏肝理气、化 瘀散结、补益肝肾、调理冲任的治疗功效。 近年来,得益于对乳腺癌的深入研究,细胞与分子生物学领域对于乳腺增生 性疾病的认知水平也有了质的飞跃。组织的增生与否是由细胞增殖与凋亡的平衡 决定的。细胞的凋亡现象是指细胞在内外凋亡因素的作用下实现的细胞程序性死 亡方式,有生理性与病理性之分。Bcl-2(B-cell lymphoma/lewkmia-2,B 淋巴 细胞瘤/白血病-2 基因)家族的 Bcl-2 和 Bax(Bcl-2 associated
22、X protein,与 B 淋巴细胞瘤-2 相关的 X 蛋白)组成异源二聚体,在“二聚体决定细胞命运”的 止痛消结汤对模型大鼠乳腺增生组织 Bcl-2、Bax 的表达影响及临床研究 2 凋亡理论中,二者的含量及比例决定了细胞凋亡的走向。通过统计细胞中 Bcl-2、 Bax 蛋白的表达来分析细胞凋亡状况,同时观察乳腺增生镜下表现,以对乳腺增 生病的分子生物学病机略窥得一斑。 本研究拟探讨止痛消结汤是否通过对Bcl-2和Bax的调控以治疗乳腺增生病。 本研究首先复制了乳腺增生病动物模型,然后用免疫组化法检测细胞凋亡情况, 最后经统计学分析实验结果, 结合一项 33 例的临床观察结论, 达到探讨止痛
23、消结 汤治疗乳腺增生病机理的目标。本实验采用的动物模型是经过病理学多次验证、 具备一定稳定性与可重复性。阳性对照药乳癖消片是辽宁好护士上市的国药准字 号中成药品种,曾出现在较多的对比试验中。希望本课题的相关研究能够进一步 理清乳腺增生病的中医研究思路,以便寻找更有效的治疗方案,解决临床中的实 际问题。 止痛消结汤对模型大鼠乳腺增生组织 Bcl-2、Bax 的表达影响及临床研究 3 一、一、文献研究文献研究 1.中医对乳腺增生病的研究情况 1.1 概念范畴 乳腺增生病类似于中医“乳癖”等病。 医宗必读曰: “癖者,僻也,内结 于隐僻,外不可见也” ,生动形象地概括了本病的临床特点。但在中医著作中
24、乳癖 的病名所指范围并不统一,如顾伯华主编实用中医外科学中乳癖病名下包含 乳腺小叶增生病和乳腺纤维瘤两个现代病名;林毅、唐汉均主编现代中医乳房 病学中则将本病的各种称谓统一为“乳腺增生病” ,本文出于论述的方便故也采 用此名。乳腺增生病在整个中医学历史长河中,有多次赋名的经历,总体来说, 将其归属于“乳癖” 、 “乳痞” 、 “乳中结核”的范畴。 1.2 关于乳腺增生病主症的认识 中医学认为本病病因主要责之于内,因情志不畅或思虑伤脾,造成肝气不得 正常疏泄而气滞痰凝血瘀,因肝肾亏虚、冲任不调而发本病。此外,饮食失节、 情志郁怒、虚劳内损成为其引发整个病理反应链条的始动因素。 明代外科正宗曰:
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