【精品论文】从马达蛋白层面探讨推拿对坐骨神经损伤.doc
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1、精品论文从马达蛋白层面探讨推拿对坐骨神经损伤大鼠轴浆运输功能的影响姚斌彬,文梅,梅旭晖,于天源5(北京中医药大学针灸推拿学院,北京 100029)摘要:目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠脊髓中马达蛋白 kinesin 及 dynein 表达改变的影响,探讨推拿治疗坐骨神经损伤的起效机制。方法:建立大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过 腓肠肌湿重测量、热痛阈实验观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的 病理学、行为学变化;通过免疫组织化学染色观察各组大鼠脊髓内 kinesin 及 dynein 表达情10况,并统计分析各组间的差异。结果:通过对模型组和模型对照组大鼠热痛阈、腓肠肌湿重的检测
2、,得出坐骨神经损伤后大鼠的感觉及运动功能明显降低的结果,在推拿治疗后,腓肠 肌湿重测量及热痛阈实验评分明显升高,并在治疗 20 天后与正常组无显著性差异;模型组、 对照组及推拿组 kinesin 及 dynein 免疫组化表达与正常组相比均有显著性提高,推拿组与模 型组、对照组相比也具有显著性差异。结论:推拿治疗可以通过提高 kinesin 及 dynein 在脊15髓中的表达,促进轴浆运输功能恢复,帮助周围神经修复,并最终改善坐骨神经损伤大鼠的 运动及感觉功能。关键词:推拿;坐骨神经损伤;轴浆运输;马达蛋白中图分类号:R244.120Investigation of TuinaTherapy
3、 on Axoplasmic Transport ofSciatic Nerve Injury Rats from Motor Protein LevelYAO Binbin, WEN Mei, MEI Xuhui, YU Tianyuan(School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing100029)25Abstract: Objective: To observe the effect of massage motor protein kinesin and
4、dynein expression changes in rat spinal cord on injury of sciatic nerve, action mechanism of massage in the treatment ofsciatic nerve injury. Methods: to establish the rat sciatic nerve injury model by clamping, gastrocnemius muscle wet weight measurement, thermal pain threshold observed in normal g
5、roup, sham operation group, model group, model group, pathological massage group rats, behavioral changes30were observed by immunohistochemical staining; spinal cord of rats and the expression of dynein in kinesin the situation, and statistical analysis of differences between the groups above. Resul
6、ts: through the detection of the model group and the model group rats heat pain threshold, gastrocnemius muscle wet weight, the sensory and motor function after sciatic nerve injury in rats significantly reduced theresults, in the massage treatment, wet weight of gastrocnemius muscle pain threshold
7、measurement and35thermal test score increased significantly, and there was no significant difference in treatment 20 days later and the normal group; model group, control group and massage group kinesin and dynein immunohistochemical expression compared with normal group were significantly improved,
8、 the massage group and the model group compared with the control group, there are significant differences. Conclusion: massage therapy can improve the expression by kinesin and dynein in the spinal cord,40promote the recovery of axon-plasma transporting function, help the repair of peripheral nerve,
9、 and ultimately improve the injured rat sciatic nerve motor and sensory function.Key words: Tuina;Sciatic Nerve Injury;Axoplasmic Transport;Motor Protein基金项目:高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(20100013110005) 作者简介:姚斌彬(1986-),男,博士研究生,推拿治疗周围神经损伤的功能评价及作用机理研究 通信联系人:于天源(1965-),男,教授,推拿治疗周围神经损伤的机理研究. E-mail: - 6 -0引言神经细胞
10、内的轴浆运输具有顺向及逆向流动的特性,能够使得营养物质从胞体运输到轴45突远端,同时使轴突末端产生的营养物质运送至胞体1 。而轴浆运输的发生依赖于马达蛋 白中的驱动蛋白(kinesin)与动力蛋白(dynein)水解 ATP 所产生的能量2。其中 kinesin 为轴浆运输的顺向流动提供动力, dynein 则为逆向运动提供动力3,它们为神经元胞体及残 端轴突的再生提供了必要的营养保证。本课题组前期的研究发现,推拿对于治疗周围神经损 伤效果明显,本次研究主要观察在周围神经损伤后,通过推拿治疗,受损神经相应节段脊髓50中的 kinesin 及 dynein 是否能提高表达,以促使轴浆运输功能的恢
11、复、周围神经的再生,从 而探寻推拿治疗周围神经损伤的起效机制。1材料与方法1.1实验动物清洁级 SD 大鼠 80 只(北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证编号:SCXK55(京)2012-0001),雄性(因雌激素能促进周围神经损伤修复)4,体重 18015g。购入后, 适应性饲养 1 周。1.2动物分组采用随机数字表将实验动物随机抽出 20 只为正常组,20 只作为假手术组,再将剩下 40只作为造模组。造模成功后,将造模组随机分为模型组 20 只、模型对照组 10 只、推拿组6010 只。1.3取材时间点于造模 7 天后、推拿治疗 10 次及 20 次后进行行为学检测及免疫组化取材。
12、1.4仪器及试剂仪器:按摩推拿手法模拟仪(中华人民共和国发明专利号 200710187403.1),RY-32 热65源自动测试仪、电热恒温培养箱(黄石市恒丰医疗器械有限公司 SKP-02.600)、病理石蜡包 埋机(沈阳市龙首电子仪器有限公司 LS-100)、石蜡切片机(北京弘泰嘉业科技发展有限公 司 Finesse 325)、显微镜(麦克奥迪 BA400)等。试剂:Kinesin 抗体(Kinesin 1 antibody) 生产厂家 biorbyt 编号 orb18770;Dynein 抗体(Anti-Dynein)生产厂家 Abcam 编号 ab6304。1.5模型制备70运用夹持损伤
13、法制作坐骨神经损伤大鼠模型:10水合氯醛以 0.35ml/100g 的剂量腹腔 注射麻醉;手术区常规消毒;于右侧臀股交界处沿坐骨神经走行方向剪开大约 1cm 的皮肤 切口,止血,用止血钳钝性分离肌肉层,暴露梨状肌下缘及坐骨神经;用 10 号持针钳,满 扣(经过测量压力为 5kg)夹持梨状肌下缘 5mm 处的坐骨神经 5s,造成 2mm 长的损伤点;术 后逐层消毒、缝合。假手术组暴露坐骨神经但不作夹持,其余步骤同模型组。751.6干预方法各组均在造模后第 7 天开始干预。推拿组使用手法模拟仪(按摩头为直径 2mm 的圆形 光滑接触面)依次刺激束缚后大鼠右侧殷门、承山、阳陵泉穴;手法模拟为点法、拨
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