二倍体和三倍体虹鳟精液低温保存寿命的研究.doc
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1、二倍体和三倍体虹鳟精液低温保存寿命的研究第24卷第1期2011年3月水产学杂志CHINESEJOURNALFISHERIESVo1.24,No.1Mar.2011文章编号:10053832(2011)01003004二倍体和三倍体虹鳟精液低温保存寿命的研究龚丽,刘奕,杨翟平,郑金霞,范兆廷(东北农业大学动物科技学院,黑龙江哈尔滨,150030)摘要:与二倍体(2n组)精原液做比较,以不同密度为组别,研究了4下两组(3nHD和3nLD)三倍体虹鳟(Oncorhynchusmykiss)精原液的保存时限.结果发现,随着保存时间的延长,精液中精子的活力和寿命逐渐降低.2n组,3nHD组和3nLD组虹
2、鳟精原液中精子分别在保存5d,4.5d和12.5d后失去活力;在7d,15d和14.5d后死亡,即三倍体虹鳟精原液4保存时间约为二倍体的2倍,说明低温短期保存三倍体虹鳟精原液可以取得较好效果.关键词:虹鳟;三倍体精液;低温保存;寿命中图分类号:$961.1文献标识码:ACryopreservationofSemeninDiploid-andTriploidRainbowTroutOncorhynchusmykissGONGLi,LIUYi,YANGZhaiping,ZHENGJinxia,FANZhaoting(CollegeofAnimalScienceandTechnology,North
3、eastAgricultureUniversity,Harbin150030,China)Abstract:Thecryopreservationtimeofsemenwasstudiedindiploid(2n)andtriploidrainbowtrout(Oncorhunchyusmykiss)at4.Theresultsshowedthatthespermmotilityandlifespanweredecreasedwiththepreservationtimeprolongation.Thespermlostrapidmotilityafter5dreservationingrou
4、p2n,after4.5dreservationingroup3nHI)andafter12.5dreservationin3nLD.andwasdiedaf-ter7dreservationingroup2n,after15dreservationingroup3n-HDandafter14.5dreservationin3nLD.At4,thepreservationtimeofsemeninthetriploidrainbowtroutwasfoundtobetwotimeslongerthanthatinthediploidrainbowtrout,indicatingthatthes
5、emenofthetriploidrainbowtroutcanbepreservedforashorttimeat4.Keywords:rainbowtrout;semenoftriploids;cryopreservation;lifespan虹鳟(Oncorhynchusmykiss)原产北美洲山区河流中,是一种冷水性鱼类,其肉质肥厚细嫩,刺少味鲜,是世界上重要的养殖鱼类之一.虹鳟的繁殖生物学具有典型的冷水性鱼类的特征,冬季产卵繁殖,配子便于长期储存和运输,因此全面深入地了解虹鳟精液低温短期保存对优良种质的利用,长距离配子的运输以及繁殖季节不同群体的杂交具有重要意义.因奇数染色体引起的减
6、数分裂障碍,三倍体虹鳟具有生长快个体大,肉质好,并可部分避免因性成熟而导致的商品性能下降,生长期缩短的问题,因而得到广泛的利用.三倍体虹鳟卵巢发育出现类雄性化趋势,不能正常发育产生卵子,在生产中利用这一现象生产大规格商品鱼(三文鱼)具有较大的优势.然而,j倍体虹鳟精巢能够发育成熟,但较二倍体发育迟缓,其产生的精液外观正常,精子具有活力,但对其生物学研究的很少,尤其是没有可授精的对象,其授精能力尚且未知.本文深入研究了低温保存状态下普通二倍体和人工诱导三倍体雄性虹鳟精子寿命与活力,以期为虹鳟精子的保存方法及三倍体雄性的育性的进一步探讨提供基础.1材料与方法2009年12月采集9尾健康成熟的三倍体
7、虹鳟(3n组)(平均体重:1764.714-87.61g;平均叉长:收稿日期:2011-1_19作者简介:龚丽(1985一),女,四川眉山人,在读硕士研究生,从事鱼类遗传育种研究.Email:gongli2704163.cOYl?通讯作者:范兆廷(1954一),男,主婪从事鱼类育种及生物技术研究.email:fanzt2003yMmom1期龚丽等:二倍体和三倍体虹鳟精液低温保存寿命的研究?31?51.63-4-3.75cm)的精液,其中5尾精液样本为乳白色,密度较高,记为3nHD组,4尾的精液为淡白色,密度较低,记为3nLD组,以及5尾二倍体虹鳟(2n组)(平均体重:1373.1423.86g
8、;平均叉长:46.534.07cm)的精液,分别装于5mlEP管中,低温带回实验室,不做任何处理,4保存.采精过程中防止水溅人,避免粪,尿污染.参考王炳谦等t进行的不同保存温度及时间对大鳞大马哈(Oncorhynchustshawytscha)精子活力影响的试验,本试验以4为精液低温保存温度.每间隔12h于室温下(约18)用解剖针针尖沾取少量精原液于干净的载玻片上,加l0ul蒸馏水激活,光学显微镜(40)下观察,秒表测定精子活力和寿命,每次3个重复.精子活力时间(movementtime,)与寿命时问(1ifetime,LT)的确定参见李胜忠等的研究标准.精子密度由红细胞计数板测定.得到的数据
9、经SPSS11.5分析,用Excel作图.2结果与分析试验发现,二倍体(2n组)个体问精液的密度范围在2.08E+102.21E+10个/mll之间,差异不显着(p>0.05),几乎是三倍体密度最大个体的3倍.而三倍体(3n组)中的3nHD组的精液为乳白色,密度为8.00E+9个/ml,明显高于3nLD组的2.35E+9个/ml,其差异极显着(p<0.01)(表1).表1不同组别精液颜色及密度Tab.1Thecoloranddensityofthesemenindiploid(3n)andtriploidrainbowtrout(2n),duringcryopreservation
10、(41二,三倍体的精液经过低温保存,其活力如图1所示.刚采集时2n组快速运动时间为27.92S,显着低于3nHD组和3nLD组(P<0.05),在4下保存120h(5d)后即失去快速运动能力.3nHD和3nLD组刚采集时的快速运动时间为30.89S和30.12s.在4下保存12h后显着上升达最高活力值44.22S和42.25S(P<0.05).随后24h内3nLD组活力显着下降(p<0.05),36h(1.5d)后缓慢降低(p>0.05),直到300h(12.5d)后全部失去快速运动能力.3nHD组精子活力于24h后显着下降(p<0.05),但高于3nLD组,至7
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