卵蛋白诱导的兔类风湿性关节炎模型的建【推荐论文】 .doc
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1、精品论文卵蛋白诱导的兔类风湿性关节炎模型的建立及评估刘贺,常非5(吉林大学中日联谊医院骨科,长春 130061)摘要:目的建立并评估卵蛋白(OVA)诱导的兔类风湿性关节炎模型。 方法 连续三周 在兔肩胛区应用卵蛋白致敏,第五周在双膝关节腔内注射卵蛋白建立类风湿性关节炎模型。 建模后测量关节直径和关节表面皮肤温度的变化;诱导后第二、四、八周取兔双侧膝关节观 察滑膜增生和软骨破坏,HE 染色观察炎症细胞浸润。结果关节腔注射后一周,关节直径10明显增大,表面皮肤温度明显升高,随后逐渐降低至稳定的水平,但仍明显高于对照组;肉 眼观察可见关节滑膜大量增生,其中第八周处死组软骨破坏明显,组织切片可见滑膜组
2、织大 量增生,炎症细胞浸润,软骨层破坏。结论 卵蛋白诱导的兔类风湿性关节炎模型致敏率高,模型稳定持久,能够很好的模拟人类类风湿性关节炎的病理过程,为临床科研提供了很好的动物模型。15关键词:外科学;兔;类风湿性关节炎;卵蛋白;实验模型;评估中图分类号:R68Establishment and evaluation of the experimental rabbit rheumatoid arthritis model induced by ovalbumin20LIU He, CHANG Fei(Department of orthropedic surgery, Jilin Univers
3、ity, ChangChun 130033)Abstract: Objective:Establish and evaluate the rabbit rheumatoid arthritis model induced byovalbumin(OVA). Methods: After continues injection of ovalbumin in rabbit scapular area forthree weeks, ovalbumin was injected into the intra-articular of each knee to induce rheumatoid25
4、arthritis models in the fifth week. We measured the joint diameter and surface skin temperature changes after injection weekly; Rabbits were sacrificed at the second ,fourth and eighth week afterarticular injection, we removed the knees and synovial tissue to observe synovial hyperplasia , cartilage
5、 destruction and inflammatory cells infiltration by HE staining. Results:The jointdiameter and surface skin temperature increased significantly after articular injection for a week,30then gradually reduced to a stable level, but still significantly higher than the control group.Macroscopic observati
6、on showed obvious articular synovial hyperplasia, cartilage destruction ofeighth week sacrificed group. Tissue sections showed synovial tissue hyperplasia, inflammatory cells infiltration and cartilage destruction. Conclusions:Rabbit rheumatoid arthritis model inducedby ovalbumin has a high sensitiz
7、ation rate, stable and durable, can imitate the pathological process35of human rheumatoid arthritis very well, offering clinical scientific research a remarkable rheumatoid arthritis animal model.Keywords: surgery; rabbit; rheumatoid arthritis; ovalbumin; experimental model; assessment0引言40类风湿性关节炎(R
8、heumatoid Arthritis,RA)是一种常见的慢性、炎性、系统性的自身 免疫性疾病,以关节和关节周围组织非化脓性炎症为主要特征,其发病机制,病理过程尚未 完全明确。常用的动物模型是弗氏佐剂诱导的 AA 模型、II 型胶原诱导的 CIA 模型,这两 种模型适用于小鼠和大鼠,关于兔的免疫诱导方法研究较少,兔的膝关节较大,易于进行药基金项目:高等学校博士学科点专项科研基金(新教师基金)(20090061120081) 作者简介:刘贺,(1986-),男,硕士研究生,主要研究方向:软骨再生,类风湿性关节炎。 通信联系人:常非,(1975-),男,副教授,副主任医师,主要研究方向:足踝外科,
9、软骨再生。E-mail:- 5 -品注射及细胞移植治疗,而且它与人的手足小关节大小相近, 对指导这些好发部位的治疗很45有意义1-2。卵蛋白(Ovalbumin)作为一种外源性抗原被广泛应用于主动致敏制作如变应性 鼻炎,支气管哮喘的动物模型等3-4,可以引起嗜酸性细胞、肥大细胞以及淋巴细胞的集聚, 很好的模拟了免疫性疾病模型的微环境。在本研究中,我们选用卵蛋白作为抗原免疫家兔, 通过关节腔内注射卵蛋白来诱导兔的类风湿性关节炎模型5。通过对该模型的评估,我们发 现卵蛋白诱导的兔类风湿性关节炎模型与人的类风湿性关节炎发病机制类似,病理过程与人50类相仿,是理想的研究人类风湿性关节炎发病机制及诊断治
10、疗的实验动物模型。1材料和方法1.1 材料1.1.1实验动物日本大耳白兔 20 只,周龄 10 周,体重 1.7-1.8 kg,雌雄不分,由吉林大学医学院基础55实验动物中心提供。1.1.2试剂鸡卵蛋白(A5503,sigma 公司),弗氏完全佐剂(F5881,sigma 公司),兔血清 IL-1、 TNF-、IgG 抗体 ElISA 试剂盒(均购自 sigma 公司),percoll 淋巴细胞分离液(P4937, sigma 公司),戊巴比妥钠(P3761,sigma 公司)。601.1.3器材电子体温计(深圳华盛昌 DT-8806H),游标卡尺(上海量具量刃厂),Olympus 显微 镜,
11、TDL80-2B 离心机、EL301strip reader 酶标仪(美国 Bio Tek 公司)。1.2 方法1.2.1类风湿性关节炎模型的诱导651试剂配制:将鸡卵蛋白溶于生理盐水,配成 20mg/ml 的溶液,用 20ml 无菌注射器 取等量鸡卵蛋白和弗氏完全佐剂,以三通管连接,反复抽吸几十分钟至充分乳化,滴于冰水 中完全不扩散为止。2致敏: 取混合液 1ml (含鸡卵蛋白 10mg),在兔肩胛间区分 5 个部位皮下注射, 第二 周及第三周分别用相同方法加强免疫一次,对照组在同样的位置注射等量的生理盐水。703第五周关节炎模型的诱发:将兔固定于手术台上,双膝关节部位除毛,常规酒精消 毒,
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