Aβ损伤后大鼠SOD和MDA的变化及补肾活血化痰法的干预作用.pdf
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1、第2 6 卷第1 期 2 008年 1月 中华中医药学刊 CH I N E S E AR CH I V E S OF T R A DI T I ON AL CHI NE S E ME DI CI N E V o l . 2 6 N o . l J a n . 2 0 0 8 A P 损伤后大鼠S O D和M D A的变化及 补肾活血化痰法的干预作用 牛英才 , 董 妙先 2 , 兴 桂华 2 , 周 丽 2 , 王建明 , 谢 宁 ( l . 黑龙江中医药大学中 药学博士后流动站, 黑龙江 哈尔滨 1 5 0 0 4 0 ; 2 . 齐齐哈尔医学院医药科学研究所, 黑龙江 齐齐哈尔 1 6 1
2、 0 4 2 ) 摘 要: 目 的: 观 察p 一 淀 粉 样 蛋白 . _ 。 ( 人 p 1 - 40 ) 大 鼠 海 马 双 侧注 射 后大 脑 组 织 超 氧 化 物 咬 化 酶( S u p e r o x id e D i s m u t a s e , S O D ) 活力和丙 二醛( m a l o n d i a l d e h y d e , M D A ) 含童的变化及补肾活血化疚法( 加减地黄饮子) 干预作 用。方法: 采用大鼠海马立体定向注射凝聚态A (3 : 一 。 诱导老年性痴呆( A l z h e i m e r s d i s e a s e , A D )
3、 动物模型。通过 分光光度法检测大鼠大脑组织S O D和M D A的活性。结果: 与假手术组比较, 模型组脑组织S O D活力明显降低 ( P 0 . 0 5 ) . C o n c l u s io n : M o d ifi e d D e c o c t i o n o f R e h m a n n i a e p ro t e c t b r a i n n e u r o n s i n j u r i e d f r o m A (3 ; 一 。 t h ro u g h i n c r e a s i n g a c t i v i t y S O D a n d a n d
4、t h e d e c r e a s i n g c o n t e n t o f M D A . K e y w o r d s , A l z h e i m e r s d i s e a s e ; m e t h o d o f t o n i f y i n g k i d n e y a n d a c t i v a ti n g b l o o d a n d d is s i p a t i n g p h l e g m ; S O D ; MDA 学刊 收稿日 期: 2 0 0 7 - 0 8 - 2 3 甚金项目: 国家自 然科学基金资助项目( 3 0 4 7 2
5、 1 2 8 ) ; 黑龙江省博士 后资 助 经费 项目 ( L B H 一 7 0 5 2 3 9 ) 作者简介: 牛英才( 1 9 6 8 一 ) , 男, 甘肃宕昌人, 副研究员, 硕士研究 生导师, 博士后, 主要从事抗阿尔茨海默病药物的药理 学研究。 流行病学调查表明, 我国5 0 0 万老年人催患阿尔茨海 默病( A D ) , 6 5 岁以上人群患病率为5 %, 且患病率随年龄 增长而增多, 8 0 岁以上可高达2 0 %, 是世界上A D患者最 多的国家。 在国家科委组织的“ 跨世纪脑科学” 会议上, 探 讨我国脑科学发展问题时, 提出首选的重点研究项目 之一 即是: 治疗A
6、D的新途径 遗传学模式与中草药相结合。 7 3 万方数据 第2 6 卷第1 期 2 008年 1月 中华中医药学刊 C H I N E S E A R C H I V E S OF T R A D IT I ON A L C H I N E S E M E D I C I N E V o l . 2 6 N o . l J a n . 2 0 0 8 织缓冲液质量) 匀浆器中匀浆成 1 0 %匀浆液。S O D和 M D A活性按南京建成生物工程研究所提供的S O D和M D A 试剂盒方法测定。 1 . 5 . 4 统计学方法 所有数据运用S P S S 1 3 . 0 软件包进行 处理,
7、组间 差异采用单因素方差分析。 进一步p o s t 一 h o c 分 析采用S N K 检验, P 0 . 0 5 ) 。 2 . 2 加减地黄饮子对A D大鼠脑组织M D A含量的影响 加朋用加 On64,J 1(筋门utl)/二vo二 由于A D发病机制的复杂性, 提示须从多途径、 多靶点来进 行A D的治疗, 任何作用单一的药物很难奏效。中医药是 我国独特的宝贵医疗资源, 对于A D等疾病的治疗积累了 丰富的理论和实践经验。中药复方的多靶点效应, 当其作 为一个整体进人体内, 通过多成分、 多途径、 多层次的综合 协调作用, 调动机体的自 稳态、 自 修复能力, 从而达到治疗 作 用
8、 。 本 研 究借助现 代医 学技术手 段进行加减 地黄饮 子防治A D的基础研究, 试图用现代医学理论阐明补肾活 血化痰法治疗A D的机制, 使其更好的推向国际市场。 1 材料与方法 1 . 1 实验药物 加减地黄饮子提取物: 肉从蓉、 麦冬、 人参、 远志、 五味 子和山茱英等用8 倍量7 0 %的乙醇回流提取 3 次, 每次 2 h ; 生姜、 薄荷和石葛蒲加 1 0 倍量水6 h 提取挥发油; 方中 熟地、 获菩、 巴戟天、 石解、 大枣与醉提取后的药渣及挥发油 提取后药渣一同加1 6 倍的水, 回流提取3 次, 每次l h ; 醇提 取浓缩液和水提取浓缩液混合, 血竭等原粉加人, 干
9、燥得干 膏, 干膏粉碎成细粉, 加人挥发油。 实验用不含赋形剂的浸 膏 Z 3 。 盐酸多 奈呱齐片由 法国P F I Z E R P G M公司制造, 产 品批号5 1 3 6 9 0 3 . A p 1 - 4 0 为北京中 杉金桥生物技术有限公 司产品。A “ , - 4 0 使用前用无菌生理盐水稀释成1 0 1 .g w L 一 , 3 7 9 0 孵育1 周, 使 其变 为聚 集 状态的A R o 1 . 2 实验动物 选用健康雄性清洁级S D大鼠1 0 0 只, 鼠龄8 一 1 2 周, 体重( 2 8 0 1 1 0 ) g , 由 北京维通利华实验动物技术有限 公司 提供, 许
10、可证编号S C X K ( 京) 2 0 0 2 - 0 0 0 3 。 经适应性饲养1 周, 随机分为空白 对照组( b l a n k ) , 假手术对照组( s h a m ) 、 模 型对照组( n e g ti v e ) 、 盐酸多奈呱齐组( p o s i t iv e ) 和加减地黄 饮子组( e x p e ri m e n t ) 共5 组。 1 . 3 试剂 考马斯兰蛋白 测定试剂盒、 超氧化物岐化酶测定试盒 和丙二醛测定试盒均由 南京建成生物工程研究所提供。 1 . 4 仪器 江湾 I 型C立体定向器( 第二军医大学) ; U V一 2 5 5 0 型紫外分光光度计(
11、日 本岛津) 。 1 . 5 方法 1 . 5 . 1 动物 模型的制作 3 实验大鼠 经腹腔注射I %戊 巴比 妥钠( 4 0 m g / k g ) 麻醉后, 立体定向器耳杆固定头部。 颅顶区备皮消毒后作2 c m切口, 分离骨膜使头骨暴露。于 前白向 后3 . O m m , 在分别向中线左和右各旁开2 . 2 m m处, 用 牙 科 钻打 开 颅骨。 垂直进 微量进样器针 2 . 8 m m , 将1 A L 溶液在5 m i n 缓慢注人, 并留针5 m i n 使溶液充分弥散。模 型组、 盐酸多奈呱齐组、 加减地黄饮子组左右侧海马各注射 1 p .L A (3 , _ ,0 ( 1
12、 0 W g ) 溶液, 假手术对照组注射1 p ,L 生理盐水 后消毒并缝合切口 皮肤。 1 . 5 . 2 给药方法 造膜后3 天开始给药, 根据人和动物按 体表面 积折算的等效剂量。 盐酸多奈呢齐组按0 . 3 3 m g k g - 1 “ d - 1 , 加减 地 黄 饮子 组按1 . O g “ k g - “ d - 给 药, 每日 1 次灌胃。 其余3 组给等体积生理盐水, 共4 周。 1 . 5 . 3 分光光度法检测S O D和M D A活性大鼠 迅速处 死, 在冰上取大脑( 除去小脑和脑干) ( 1 : 9 = 大脑质量, 组 注: n = 9 , 与模型组比较, *P
13、0 . 0 5 ) 。 3 讨论 祖国医学认为, 老年性痴呆的成因与肾有十分密切的 关系。肾为先天之本, 肾藏精, 主骨髓, 上通于脑。脑为元 神之府, 是人体精气、 髓海和神明凝聚之所, 人的视、 听、 嗅、 感觉及思维记忆等皆出于脑。脑的这些功能又都在脑髓的 充盈下才能发挥, 而髓海的充盈又依赖于肾气的温煦、 充 养。 医方集解 云“ 肾精不足, 则志气衰, 不能上通于心, 故迷惑善忘也” 。 近年来, 中医药对老年性痴呆治疗的研 究报道中多数学者认为, 肾虚是导致老年性痴呆发病的重 要病理基础, 痰凝血淤则是老年性痴呆发病的重要因素, 本 虚 标实是老年性痴 呆的 基本病机冈。 加减地黄
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