CIK细胞体外培养的免疫表型.pdf
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1、论 著 C I K细胞体外培养的免疫表型 吴昌平蒋敬庭邓海峰陆明洋李 敏王 赫吴 骏张红宇季 枚赵伟庆 摘要 目的 探讨体外培养过程中细胞因子激活的杀伤细胞( C I K ) 免疫表型的动态变化。方 法通过向外周血单个粒细胞( P B M C ) 中加人白细胞介素 2 ( I L - 2 ) , Y I L - 1 a , Y 干扰素( Y - I F N ) 与抗 C D 3 M c A b , 诱导出C I K细胞。 经流式细胞分析法对C I K细胞进行动态表型分析。结果动态表型 分析显示, 在第1 4 -2 1 天时C D 3 + C D 1 6 + 5 6 + 细胞为( 3 1 . 6
2、 士5 - 5 ) %一( 3 5 . 8 士9 . 7 ) 0 o , 呈高表达的 平台期。结论C I K细胞在体外培养 1 4 - 2 1 d , C I K细胞C D 3 + C D 1 6 十5 6 + 双阳性细胞呈高表达, 此 时临床应用可取得较好疗效。 【 关键词】细胞因子激活的杀伤细胞; 细胞因子; 免疫表型; 肿瘤 T h e i m m u n e p h e n o t y p e o f C I K ce l l s i n v i t ro W U C h a n g p i n g , J I A N G J i n g t i n g , D E N G H a i
3、f e n g , e t a l . D e p a r t m e n t o f T u m o r B i o l o g i c a l T r e a t m e n t ,A f f i l ia t e d T h i r d H o s p i ta l , S o o c h o w U n i v e r s i t y , C h a n g z h o u 2 1 3 0 0 3 , C H 拈 风 A b s t r a c t O b j e c t i v e T o s t u d y t h e d y n a m ic d e v e l o p m e
4、n t s o f t h e im m u n e p h e n o t y p e o f C I K c e l l s i n v i t r o . Me t h o d s T h e C I K c e l l s w e r e i n d u c e d 场 a d d i n g I L - 2 , / I L - 1 a , Y - I F N a n d C D 3 Mc A b i n v i t r o . T h e i m m u n e p h e n o t y p e o f t h e C I K c e l l s w a s a n a l i z
5、 e d b y f l o w c y t o m e t r y . R e s u l t s T h e i m m u n e p h e n o t y p e w a s a n a l y z e d . T h e C D 3 + C D 1 6 +5 6 + o f C I K c e l l s w a s ( 3 1 . 6 士5 . 5 ) 肠一( 3 5 . 8 士9 . 7 ) %o n t h e 1 4 t h d a y t o 2 1 s t d a y , w h i c h s h o w e d a f l a t r o o f w i t h h
6、 ig h e x p r e s s i o n . C o n c l u s i o n T h e C D 3 + C D 1 6 +5 6 + o f d o u b l e p o s i t i v e C I K c e l l s h a s a h ig h e x p r e s s i o n c u l t u r e d i n v i t r o o n t h e 1 4 t h d a y t o 2 1 s t d a y . A b e t t e r c u r a t iv e e f f e c t m a y b e o b t a in e d
7、w h e n u s e d c l i n i c a l l y d u r i n g t h i s p e r io d o f t im e . K e y w o r d s C y t o k in e - i n d u c e d k i l l e r c e l l s ; C y t o k i n e s ; I m m u n e p h e n o t y p e ; T u m o r J i a n g s u M e d J , S e p t e m b e r 2 0 0 5 , 3 1 ( 9 ) : 6 4 4 一 6 4 5 . 我们曾对癌性胸
8、水肿瘤浸润淋巴细胞( T I L ) 的 细胞免疫表型进行了研究E l l , 并为临床应用提供了 理论依据 2 1 , 取得了较好疗效。但T I L的提纯、 扩 增、 取材及操作复杂, 体内 输注免疫活性细胞可以在 没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下, 直接 杀伤肿瘤细胞, 并且调节和增强机体免疫功能, 改善 肿瘤患者生存质量 3 , 4 。由细胞因子激活的杀伤细 胞( C I K ) 更具有高增殖力和高细胞毒性, 可达到更 好的抗肿瘤效果。本室对 C I K细胞的免疫表型进 行了实验研究, 为临床治疗恶性肿瘤提供理论依据。 资料与方法 一、 试剂 基因重组人白 细胞介素2 ( r h
9、I L - 2 ) ( 山东泉港药 业有限公司) ; 抗C D 3 M c A b ( 美国A n t i b o d y D i a g - n o s t i c a I n c . 公司) ; 基因重组 I L - l a ( 美国P r o m e g a 公司) ; 基因重组 y 干扰素( y - I F N )上海克隆生物 基金项目: 江苏省卫生厅重大科研课题( K 2 0 0 4 0 3 ) 作者单位: 2 1 3 0 0 3 常州, 苏州大学附属第三医院( 常州市第一 人民医院) 肿瘤生物诊疗中心 高技术有限公司) ; 淋巴细胞分离液( 上海试剂二 厂) ; R P MI 1
10、6 4 0 ( 美国G I B C ( ) 公司) 。各种抗体( 美 国B e c k m a n C o u l t e r 公司, 苏医生物基因技术公司) 同型对照 O p t i C l o n e I g G 1 F I T C / I g G 1 P E / I g G 1 P E - C y 5 , I O T e s t I g G 1 F I T C / I g G 1 P E , 单克隆抗体 O p t i C l o n e C D 4 - F I T C / C D 8 - P E / C D 3 P E - C y 5 , I O T e s t C D 3 - F I
11、 T C / C D 1 6 十C D 5 6 - P E , 流式细胞分 析仪B e c k m a n C o u l t e r E P I C S X L ( 美国B e c k m a n C o u l t e r 公司) 。 二、 外周血单个核细胞( P B MC ) 的采集 在采血机上用淋巴细胞采集程序单采O型健 康人成份血, 经淋巴细胞分离液密度离心, N S 洗涤 获 得P B M C , 三、 C I K细胞的 诱导培养 获得的P B MC用 R P MI 1 6 4 0 液调至起始密度 2 . 0 X 1 0 6 / L , 第 1 天加入 l . 5 X 1 0 6
12、U / L的 y - I F N, 放置3 7 0C , 5 %C O , 培养箱中培养2 4 h 后加入浓度 为1 0 0 p g / L的抗C D 3 Mc A b , 5 . 0 X 1 0 5 U / L的I L - 2 和l . 0 X 1 0 5 U / L的I L - 1 a , 以后每3 天添加培养液。 四、 C I K细胞免疫表型分析 分别于隔天取C I K细胞的培养物1 0 0 川, 调整 细胞浓度约 5 . 0 X 1 0 9 c e l l s / L , 加人相应检测抗体 2 0 r d 混匀, 室温1 8 2 5 0C 避光放置1 5 m i n 后, 取出 加人O
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