D17S1878位点多态性与原发性高血压的连锁分析.pdf
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1、 中 国 医 学 科 学 院 学 报 A C T A A C A D E M IA E M E D I C I N A E S IN I C A E 论著 D 1 7 S 1 8 7 8 位点多态性与原发性高血压的连锁分析 付 凌 雨, 赵 彦 艳 “ , 时 景 澎, 李 辉, 王 文 利 , , , 吕 晶 玉 , 刘 洪 ( 中国医科 大学医学遗传学 教研室 , 沈 阳 1 1 0 0 0 1 ) 摘要:目 的 探 讨D 1 7 S 1 8 7 8 位点多态 性是否与高 血压易感基因 存在连锁。 方法 在高血压高发区收 集4 5 个原发 性高血压家 系的流行 病学资料, 通 过P C R
2、 扩增及遗传分 析仪确定D 1 7 S I 8 7 8 位 点的多态 分布, 应用表型不一致同 胞对病 例一对照研究和受累同胞对的方法分析该位点与原发性高血压易感基因的连锁关系。结果高血压受累同胞与非高血 压受累同胞相比,年龄、男性、饮酒、嗜盐、平均收缩压、平均舒张压、腰臀比值、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密 度脂蛋白均显著高于非高血压受累同胞 ( P0 . 0 5 ) o D1 7 S I 8 7 8多态性位点共有i t 个等位基因,其在家系中高血压者 与非高血压者的分布差异具有显著性 ( P0 . 0 5 ) 。符合受累同胞对分析条件的有4 3个家系,检验结果为:t 二 3 . 0 5 ,
3、P 0 . 0 5 ,即该位点的传递一致性比预期值大。结论在原发性高血压家系中发现D 1 7 S I 8 7 8 多态性位点可能与原发性 高血压的易感基因存在连锁 关键词:原发性高血压; 遗传易感性; 连锁 中图分类号:8 3 9 4 . 5文献标识码:A文章编号:1 0 0 0 - 5 0 3 X( 2 0 0 6 ) 0 2 - 0 1 2 9 - 0 5 L i n k a g e A n a l y s i s o f t h e P o l y mo r p h i s m a t D 1 7 S 1 8 7 8 S i t e w i t h E s s e n t i a l H
4、 y p e r t e n s i o n 0 F U L i n g - y u , Z H A O Y a n - y a n “ , S H I J i n g - p u , L I H u i , W A N G W e n - l i “ , L O J i n g - y u , L I U H o n g ( D e p a n n w n t o f M e d i c a l G e n e tic s , C h i n a M e d i a l U n i v e rs i ty , S h e n y a n g 1 1 0 0 0 1 ,C h in a ) A
5、 B S T R A C T: O 坷e ct i v e T o e x p l o r e t h e l in k a g e o f t h e p o l y m o r p h is m a t D 1 7 S 1 8 7 8 s it e w it h s u s c e p t i b l e g e n e o f e s s e n t i a l h y p e rt e n s i o n . M e t h o d s F o rt y - f i v e p e d i g r e e s f ro m th e h i g h p r e v a l e n c
6、e r e g i o n o f t h e h y p e rt e n - s i o n w e r e c o ll e c te d . T h e p o l y m o r p h i s m o f D 1 7 S 1 8 7 8 s i t e w a s g e n o t y p e d w i th g e n e t i c a n a l y z e r a n d g e n e s c a n s o f tw a r e . D i s c o r d a n t s i b p a i r a n a ly s i s a n d a ff e c t e
7、 d s i b p a i r a n a l y s is w e r e u s e d in l i n k a g e a n a l y s i s . R e s u l t s T h e r e w e r e s i g n i f i c a n t d i ff e r e n c e s i n t h e a g e , m a l e , a lc o h o l - c o n s u m i n g , o v e r - s a l t i n t a k i n g , a v e r a g e s y s t o l i c p r e s s u r
8、 e , a v e r a g e d i a s t o l i c p re s s u r e , w a i s t - t o - h i p r a t io , to t a l c h o le s t e r o l , h ig h - d e n s it y l i p o p ro t e in , a n d l o w d e n s i t y l i p o p r o t e in b e t w e e n t h e h y p e rt e n s i v e s ib a n d t h e n o r m o te n s i v e s ib
9、( P0 . 0 5 ) . T h e r e w e r e e l e v e n a l l e le s a t D I 7 S 1 8 7 8 s i t e , a n d t h e a l l e l e f r e q u e n c y w a s s i g n ifi c a n t l y d i ff e r e n t b e tw e e n t h e h y p e rt e n s iv e a n d n o r - m o te n s iv e s i b s ( P0 . 0 5 ) . F o rt y - t h r e e p e d i
10、g r e e s w e re a n a l y z e d w it h a ff e c t e d s ib p a i r a n a l y s i s( 二 3 . 0 5, P 0 . 0 5 ) . C o n c l u s i o n T h e p o l y m o r p h i s m o f D 1 7 S 1 8 7 8 m a y b e l i n k e d w i th s u s c e p t i b l e g e n e s o f e s s e n t i a l h y p e rt e n s io n . Ke y w o r d
11、s ; e s s e n ti a l h y p e r te n s io n ; g e n e t ic s u s c e p ti b ili ty ; li n k a g e A c tor A c a d Me d S in , 2 0 0 6 , 2 8 ( 2 ) ; 1 2 9一 1 3 3 基金项目: 重大疾病遗传资源的收 集、保存与利用 ( 2 0 0 2 B A 7 1 1 A 0 8 ) S u p p o r te d 切th e C o ll e c ti u o , C u n s e r . a ti u n , a n d U ti h r e ti
12、 o n o f th e S e v e r e D is e a s e s R e s o u r c e P ro g r a m ( 2 0 0 2 B A 7 1 1 A 0 8 ) ; “ D e p a r tm e n t o f C l in ic a l E p i d e n ti o lo g y , F irs t A ffilia te d H o s p ita l , C h i n a M e d ic a l U n iv e rs ity, S h e n y a n g 1 1 0 0 0 1 ; * * D e - pe n t o f P re c
13、 a u ti o n , H e a lth B u r e a u o f Z h a n g w u C o u n ty , F u s in 1 2 3 2 0 0 ; # C o r r e s p o n d i n g a u th o r T e l : 0 2 4 - 2 3 2 5 7 3 2 2 , F n: 0 2 4 -2 3 2 5 7 3 2 2 , E - m a il : y y e h a o mo a m a d me n V o l . 2 8 N o . 2 1 2 9 中 国 医学 科 学 院 学 报 原发性高血压是一类严重危害人类健康的疾病, 以
14、该病为主要危险因素的心脑血管疾病在许多发达 国家及发展中国家均居致死疾病的首位。目前应用 基因组扫描和候选基因策略已发现人类 1 7号染色体 上有几个重要 的原发性高血压候选区域和候选基 因 。 孟德尔遗传性高血压的致病基因W N K 4 也位 于1 7 号染色体 2 1 。本研究在人口 流动性相对较小、 原发性高血压患病率相对较高的辽宁省西部地区彰 武县收集高血压家系,根据人类 1 7 号染色体上原发 性高 血压的重要候选区域, 在候选基因附近选取微 卫星 位点 ( s h o rt t a n d e m r e p e a t , S T IR )进行受累同 胞 对分析,鉴定该 S T
15、R位点是否与高血压易感基因存 在连锁 。 对象和方法 对象2 0 0 3年1 月 一 2 0 0 5年1 2月在辽宁省西部 地区彰 武县内, 选取符合诊断 标准的高血压 患者, 高 血压 诊断执行1 9 9 9 年W H O规定标准,收缩压 ( s y s - t o l i c b lo o d p r e s s u r e , S B P ) 31 4 0 m m H g( 1 m m H g= 0 . 1 3 3 k P a )和 ( 或) 舒张压 ( d ia s t o l i c b l o o d p r e s s u r e , D B P ) 3 9 0 m m H g
16、为高血 压。 如果高血压患者的家庭 里,连续两代人有高血压,第一代有 1 人为原发性 高血压,第二代人中有两人为原发性高血压,排除继 发性高血压,就可确认为高血压家系,收集其家人的 血样和资料。共收集家系4 5个 ( 其中有 1 0个无父母 资料的受累同胞对) ,调查对象 2 5 7人,年龄 ( 5 3 . 0 8 = 1 4 . 1 1 ) ( 1 6一9 3 )岁,其中男性 1 3 2人 ( 5 1 . 3 6 %) 、女性 1 2 5 人 ( 4 8 . 6 4 %) ,均为汉族。 流行病学调查采用统一设计的调查表对选定 家系的先证者及其亲属进行调查,内容包括:一般 状况 ( 年龄、性别
17、、子女数等) 、用盐量、 饮食习惯、 吸烟、饮酒、家族史、既往史、性格等。测量血压、 身高、 体 重、 腰围、 臀围, 计算体重指数 ( b o d y m a s s i n d e x , B M I )和腰臀比值 ( w a i s t - l o - h ip r a t io , WH R) , 进行血清总胆固醇 ( t o t a l c h o l e s t e r o l , T C ) 、高密度脂 蛋白 ( h i g h - d e n s i ty l ip o p r o t e i n , H D L ) 、甘油三酷 ( t r i - g l y c e r id
18、 e , T G ) 、 低密度脂蛋白 ( l o w d e n s i t y l i p o p r o - t e in , L D L )等生化指 标的测定, 其中吸烟指平均每 天吸香烟 1 支,连续 1 年以上;饮酒指每周至少饮 用同一类酒 1 次以上。血压的测量按国际通用测量 方法和质量控制规定进行。血压测量前被测者休息 3 一 5 m i n ,在测量前 3 0 m in内禁止吸烟和饮用咖啡, 每人连续测量 3次,测量时被测者取坐位,坐于靠 背椅上裸露右上臂,肘部置于心脏同一水平, 相隔2 m i n 重复测量,取平均值作为最后的血压值。家系中 疑似高血压患者, 多次测量血压及
19、站立测量血压, 然后由经验丰富的心血管专科医生明确或排除高血 压。 表型不一致同胞对的病例一 对照研究4 5 个高血 压家系中,以非受累同胞 ( 3 7人)为对照组,受累 同胞 ( 1 6 1 人)为病例组, 进行病例一 对照研究比 较 分析两组之间流行病学资料的一般特征和相关的原 发性高血压危险因素的差异。 血清学检测T G应用甘油磷酸氧化酶法,血清 T C , H D L , L D L 应用终点酶法进行检测,血清钾、 钠应用电极法,血清钙应用偶氮砷法进行检测。 D N A提取与 P C R晨起空腹抽取静脉血5 m l , 2 % E D T A抗凝, 饱和氯化钠法提取外周血基因组 D N
20、 A 。微卫星 D 1 7 S I 8 7 8 多态位点的 P C R引物由N C B I 网站上获得,上游引物:5 - A C G T C A T A G T C T C T C T A - A A C C G T G C -3 ,下游 引物:5 - G T G C T G A C T G G A A A T - C T C A A G G - 3 , 。 用6 - F A M ( 6 - c a r b o x y - fl U O r e 6 C e ln , P E 公司,U S A)蓝色荧光标记引物,P C R反应体系为 1 0 A l , 其中 基因组D N A( 约2 0 n g
21、 / w l ) 1 . 0 p 1 ; 2 H o t s ta rt( 包含 M g 离子, b u f f e : 和酶的溶液)5 p 1 ; 上游引物0 . 5 R l ;下游引物0 . 5 p 1 ;无菌水3 R l , P C R反应条件 为:9 4 变性 5 m i n ,以 9 4 C 3 0 s , 5 7 9 C 3 0 s , 7 2 9 0 3 0, 循环4 0次, 7 2 延伸 1 0 m i n , P C R 产物通过等体积酚 / 氯仿抽提纯化, 3 m o l/ L N a A c ( p H 5 . 2 )和无水乙醇沉淀,真空抽干, 加水 至原体积。 基因型分
22、析对所有家系成员包括父母子女共 2 1 7 人进行D N A的S T R检测,取1 闪P C R纯化产 物、 0 . 5 p , 1 内标 ( G e n e S c a n - 5 0 0 i n t e r n a l s t a n d a r d , P E 公司, U S A ) 及1 2 闷甲 酞胺 ( P E 公司, U S A ) , 充 分混匀, 在 9 6 0 0型P C R仪上9 5 变性3 m i n 后,置 于冰上骤冷,在A B I P R I S M “ “ 3 1 0型遗传分析仪 ( P E 公司, U S A )上进行毛细管电泳。电泳介质为 P O P 4胶,电
23、泳条件为 1 5 k V电泳 2 4 m i n 。毛细管为 4 7 c m x 5 0 W m( 内 径) 。应用A B I P R I S M T M 3 1 0 型遗 传分 析仪G e n e S c a n A n a l y s i s 2 . 0 2 软件进行自 动基因 型分析。 统计学处理 所有数据用F o x p ro 6 . 0录人并进 行逻 辑校验, 抽样5 %进行质控, 用S P S S 1 2 . 0 统计 软件进行基本统计量描述及相关危险因素分析 (2X 1 3 0 A p r il, 2 0 0 6 D 1 7 S 1 8 7 8位点多态性与原发性高血压的连锁分析
24、和t 检验) 。 受累同胞对分析应用S u a re z 法 3 1 : S u a r e z 加权 统计量: 为: t 二【 F Z w 一J E ( Z w ) /( Y S Z w ) Ir e , 其 中Z w 二 2 Z / s ( s - 1 ) , E ( Z w ) 二 。 - 1 , 8 1 w二 ( s - 1 ) / s 。这 里E 为对全部家庭求和。H o 假设为: 标记等位基因 与致病基因独立分离, 在此假设下,t 符合渐近标准 正态分布 ( 。二 0 . 0 5 ) 。 D 1 7 S 1 8 7 8 位点等位基因 在高 血压家系中的分布 D 1 7 S 1 8
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