EPO对阿霉素所致心衰大鼠氧化应激能力及细胞凋亡水平的影响.pdf
《EPO对阿霉素所致心衰大鼠氧化应激能力及细胞凋亡水平的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《EPO对阿霉素所致心衰大鼠氧化应激能力及细胞凋亡水平的影响.pdf(5页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、南昌大学学报( 医学版) 2 0 1 0 年第5 0 卷第1 期J o u r n a lo fN a n c h a n gu n i v e r s i t y ( M e d i c a lS c i e n c e ) 2 0 1 0 。V 0 1 5 0N o 15 E P o 对阿霉素所致心衰大鼠 氧化应激能力及细胞凋亡水平的影响 邓琴琴1 ,王梦洪2 ,文渊2 ,祝志云2 ( 1 南昌大学研究生院医学部2 0 0 7 级;2 江西省高血压痛研究所,南昌3 3 0 0 0 6 ) 摘要:目的 评价红细胞生成素( E P o ) 对阿霉素所致心力衰竭大鼠氧化应激和细胞凋亡水平的影响,
2、并探讨其抗 心力衰竭的可能机制。方法3 0 只S D 大鼠随机分为E P o 组、心衰组和对照组( 予相同体积生理盐水) 。每组1 0 只。采用腹腔注射盐酸阿霉素( A D R ) 建立心衰大鼠模型,E P 0 组每日给予E P o5 0U k g ;心衰组每日给予相同 体积生理盐水,观察1 0 周。第1 1 周行心脏超声检测并测定大鼠血清中超氧化物歧化酶( s ( ) D ) 、丙二醛( M D A ) 水 平及心肌组织中F a sm R N A 的表达,T u n e l 法测心肌细胞凋亡。结果与心衰组相比,E P o 组左室射血分数显著 提高、M D A 及F a sm R N A 的水
3、平降低、心肌细胞凋亡指数( A I ) 减少、S O D 活力增加( 均P o 0 1 ) ;与对照组相比, 心衰组大鼠s O D 活力下降、M D A 水平升高、F a sm R N A 的表达及心肌细胞A I 指数增加( 均P o 0 1 ) 。结论 E P 0 能显著减轻阿霉素诱导的血流动力学障碍、改善心功能,且此作用可能与氧化应激能力及细胞凋亡水平降低 有关。 关键词:红细胞生成素;心力衰竭;心功能;氧化应激;凋亡;动物,实验;大鼠 中图分类号:R 一3 3 2文献标志码:A文章编号:1 0 0 0 一2 2 9 4 ( 2 0 1 0 ) 0 1 一o 0 0 5 一0 4 E f
4、f e c to fE r y t h r o p o i e t i no no x i d a t i v eS t r e s sa n dM y o c a r d i a l A p o p t o s i si nR a tw i t hA d r i a m y c i n i n d u c e dH e a r tF a i l u r e D E N GQ i n q i n l ,w A N GM 蛐分h o n 乎,w E NY u 粕2 ,z H uz h i y 咖2 ( 1 2 0 0 7G r 口d PD 厂 他d i f 口ZD P 夕口r 7 n P 7 l
5、 D ,G r 口d “口f PS f o o ZD 厂N 口7 2 f n 咒gL k i t 肥r s i y ; 2 H 了户P r P 竹s i o 挖R P s P 口,f J I lJ 以s i “Po ,i n 7 l g z i ,N 口7 z f | I l 口行g3 3 0 0 0 6 ,C 冼f ,l 口) A B S T R A C T :O b j e c “v eT oi n v e s t i g a t et h ee f f e c to fe r y t h r o p o i e t i n ( E P O ) o no x i d a t i v es
6、t r e s sa n d m y o c a r d i a la p o p t o s i si nr a tw i t ha d r i a m y c i n i n d u c e dh e a r tf a i l u r ea n dt oe x p l o r ei t sp o s s i b l em e c h a n i s m M e t h o d s3 0S Dr a t sw e r er a n d o m l yd i V i d e di n t ot h r e eg r o u p s :E P 0g r o u p ,h e a r tf a i
7、 l u r e g r o u pa n dc o n t r o lg r o u p ,r e c i v e dae q u i V a l e n tw i t h1 0r a t si ne a c hg r o u p T h eh e a r tf a i l u r em o d e l w a se s t a b l i s h e db yi n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no fa d r i a m y c i n I nE P og r o u p ,r a t sr e c i v e de r y t h
8、 r o p o i e t i n ( 5 0U k g 一1 ) e v e r y d a yf o rf i v ew e e k s ,w h i l ei nh e a r tf a i l u r eg r o u p ,r a t sr e c i v e dae q u i v a l e n t V o l u m eo fs a l i n ed a i l y A f t e r10w e e k so fr e m e d y ,t h ee c h o c a r d i o g r a p h yw a sp e r f o r m e di nt h ee l
9、e v e n t hw e e ka n ds u p e r o x i d ed i s m u t a s e ( S O D ) a c t i v i t y ,m a l o n d i a l d e h y d e ( M D A ) c o n c e n t r a t i o na n d t h ee x p r e s s i o no fF a sm R N Aw e r ed e t e c t e d ,a n dm y o c a r d i a la p o p t o s i sw a sa s s e s s e db yu s i n g T U N
10、 E Lm e t h o d R 终u l t s C o m p a r e dw i t hh e a r tf a i l u r eg r o u p ,E P 0s i g n i f i c a n t l yi m p r o v e dl e f t v e n t r i c u l a re j e c t i o nf r a c t i o n ,e n h a n c e dt h ea c t i v i t yo fS O D ( P :0 0 1 ) ,d e c r e a s e dt h ec o n t e n to f M D Aa n dt h e
11、e x p r e s s i o no fF a sm R N A ,a n dr e d u c e dm y o c a r d i a la p o p t o s i s C o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ,S O Da c t i v i t yw a ss i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ,a n dM D Ac o n t e n t ,F a sm R N Ae x p r e s s i o n a n dm y o c a r d i a la p o p t o s
12、 i sw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e di nh e a r tf a i l u r eg r o u p ( P O 0 1 ) C o n c l s i o nE P 0m a yr e l i e v ea d r i a m y c i n i n d u c e dh e m o d y n a m i ca b n o r m a l i t ya n di m p r o v ec a r d i a cf u n c 一 收稿日期:2 0 0 9 1 2 一0 8 基金项目:国家科技支撑计划( 2 0 0 8
13、 B A l 6 8 8 0 2 ) 作者简介:邓琴琴( 1 9 8 4 一) ,女,硕士研究生,主要从事红细胞生成素对心力衰竭大鼠影响的研究。 通信作者:王梦洪,教授,主任医师,E - m a i l :舢h 6 6 6 8 8 8 s i n a c o m 。 万方数据 6 南昌大学学报( 医学版) 2 0 1 0 年1 月,第5 0 卷第1 期 t i o ni n v o l v i n gt h ei m p r o V e m e n to fo x y g e ns t r e s sa n dd e c r e a s eo fa p o p t o s i si nc a
14、r d i a cm y o c y t e s K E YW o R D S :e r y t h r o p o i e t i n ;h e a r tf a i l u r e ;c a r d i a cf u n c t i o n ;o x i d a t i v es t r e s s ;a p o p t o s i s ; a n i m a l s ,l a b o r a t o r y ;r a t s 红细胞生成素( E P 0 ) 是由肾脏分泌的一种活性 糖蛋白,最初主要用于治疗慢性肾性贫血。随着对 E P 0 的深入认识,E P 0 的临床应用逐步扩展。目前
15、认为,促红细胞生成素具有抗凋亡、抗氧化应激的作 用并对心、脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作 用 1 2 。使用E P 0 治疗合并贫血的慢性心力衰竭 ( C H F ) 患者,可显著改善患者的心功能及临床症 状 争引。本实验拟用促红细胞生成素干预慢性阿霉 素诱导的心功能不全及心肌组织的损伤,并检测其 血液中超氧化物歧化酶活性( S O D ) 与丙二醛 ( M D A ) 含量和心肌细胞凋亡基因F a sm R N A 表达 的变化,从氧自由基及细胞凋亡的角度,探讨促红细 胞生成素对阿霉素诱导的心肌损伤的可能保护机 制。 1 材料 1 1 实验动物 成年雄性S D 大鼠3 0 只,体质量( 2
16、 5 0 2 7 0g ) , 由上海西普尔一必凯实验动物有限公司提供。 1 2 主要仪器 7 5 1 一G M 紫外分光光度计( 上海惠普分析仪器 有限公司) ;超低温冰箱( 青岛海尔集团公司) ;水平 电泳槽( 美国B i o - R a d 公司) ;半定量P C R 仪( 德国 B e c k m a n 公司) ;显微镜( O l y m p u s 日本光学工业株 式公司) 。 1 3 主要试剂 S o D 、M D A 试剂盒( 南京建成生物有限公司) , T R I z o l R N A 抽提试剂盒( 北京天根生化科技有限公 司) ,R T P C R 试剂盒( 北京天根生化
17、科技有限公 司) ,T U N E L 试剂盒( 美国p r o m e g a 公司) ,阿霉素 ( 美国s i g m a 公司) ,红细胞生成素( 美国s i g m a 公 司) 。 2方法 2 1 动物模型制备及分组 雄性S D 大鼠3 0 只,喂养3d 后随机分为E P 0 组、对照组和心衰组。E P o 组和心衰组采用腹腔注 射阿霉素造模,大鼠用2 5m g k g - 1 次一,每周 注射2 次,共5 周,对照组同时腹腔注射等体积生理 盐水,给药容积同盐酸阿霉素。E P O 组每日给予 E P 0 ( 5 0U k g _ 1 ) ;心衰组及对照组每日给予相同 体积生理盐水,给
18、药均采取腹腔注射方式,又5 周, 在第1 1 周行心脏彩超检查。 2 2 超声心动图检查 选用G Ev i v i d 7 彩色多谱勒超声诊断仪,高频 探头( 1 2M H z ) ,G a i n5 0d B ,深度2 5c m 。于实验 第1 1 周末处死大鼠前4 8h 进行,腹腔注射3 戊巴 比妥钠麻醉,仰卧固定于木板上,胸部脱毛,接心电 图,取大鼠胸骨旁左室长轴切面测量左室舒张末径 ( L V I D d ) 、左室收缩末径( L V I D s ) 、射血分数( E F ) 、 缩短分数( F S ) 。 2 3 病理改变 取左室心肌部分,以1 0 甲醛固定,常规石蜡 包埋,病理切片
19、,将切片用二甲苯脱蜡,酒精梯度脱 水,H E 染色,透明,封片;光镜下观察。 2 4M D A 含量和S o D 活性的测定 检查给药结束后,大鼠股静脉取血样。采用邻 苯三酚法测定S o D 的活性;采用硫代芭比妥酸法测 定M D A 的含量,具体步骤按试剂盒说明书方法进 行。 2 5 心肌细胞凋亡检测 实验步骤严格按照细胞凋亡原位检测试剂盒说 明书进行。左心室组织固定、包埋、切片;脱蜡; 体积分数o 3 的H :0 2 封闭3 0m i n ; 2 0m g L _ 1 蛋白酶K 消化膜蛋白及核蛋白;加 T u n e l 反应液,3 7 孵育7 0m i n ;加入抗荧光素 抗体;D A
20、B 显色,苏木精复染,脱水透明,封片。 以不加T d T 酶者为阴性对照,分别以用D n a s eI ( 1 0m g L _ 1 ) 消化的左心室心肌切片为阳性对照。 正常心肌细胞核呈蓝色,凋亡心肌细胞核呈棕黄色。 每只大鼠( 光镜下) 观察4 张切片,每张切片在4 0 倍 视野下,随机计数5 个不同视野的凋亡细胞及细胞 总数,计算凋亡细胞数占总细胞的百分率,取其平均 值为凋亡指数( A I ) 。 2 6R T - P C R 测定心肌F 够m R N A 的表达 取1 0 0m g 左右的心肌组织加入约lm LT r _ t i z 0 1 ,用R N A 提取试剂盒提取心肌总R N
21、A ,随后按 R T P C R 的试剂盒进行扩增,合成c D N A 。引物序 列由上海捷瑞生物技术有限公司合成。F a s 引物: 上游5 一C G C C T A T G G T T G T T G A C ( 3 ,下游5 一 C T C C A G A C A T T G T C T C C 一3 ,扩增片段为4 7 7b p l 哥a c t i n 引物:5 一A G G C C G G C T T C G C G G G C G 一3 , 下游引物5 一C T C G G G A G C C A C A C G C A G3 ,产物 万方数据 邓琴琴等;E P O 对阿霉索所致
22、心衰大鼠氧化应激能力及细胞凋亡水平的影响 7 2 6 5b p 。反应条件:9 4 1 0m i n ;9 4 5 0s ,5 3 5 0s ,7 2 6 0s ,3 5 个循环;7 2 7m i n 后结束扩增 反应。P C R 产物用1 5 琼脂糖凝胶电泳检测。经 凝胶自动分析成像系统和I m a g eJ 图像分析软件, 取F a s 和B a c t i nm R N A 光密度比值对产物进行半 定量分析。 2 7 统计学方法 S P S S1 4 O 统计软件对所得结果进行处理,数 据用均数标准差( i 5 ) 表示,采用f 检验。 3 结果 3 13 组心脏超声表现 与对照组相比,
23、心衰组L V I D d 、L V I D s 明显增 加( P 0 0 1 ) ,F S 明显降低( P O 0 1 ) 。提示心衰 组心腔扩大,收缩功能显著降低。E P 0 组心功能较 心衰组明显改善,F S 、E F 值明显增加( P O 0 1 ) 。 结果见表1 、图1 。 表13 组心脏超声测定结果 i 士s 与对照组比较,* P o 0 1 ;与心衰组比较,P O 0 1 。 A :对照组;B :心衰组;C :E P o 组。 图13 组心脏超声表现 3 23 组心肌组织病理表现 光镜下可见对照组心肌细胞形态、胞质、间质及 横( 纵) 纹均为正常,但心衰组存在心肌细胞横( 纵)
24、纹不清,部分区域肌质纤维溶解,胞浆空泡变性,不 同程度的炎症细胞浸润和间质水肿病变表现。E P 0 组以上病变较心衰组有明显减轻,心肌组织横( 纵) 纹存在( 图2 ) 。 A :对照组;B :心衰组;C :E P O 组。 图23 组大鼠心肌组织病理表现( H E 染色) 3 3M o D 含量和S O D 活性 3 组大鼠血液M D A 含量和S O D 活性见表2 。 表23 组M o D 含量和s o D 活性测定结果i 士$ 与对照组比较,* P o 0 1 与心衰组比较,P o 0 1 。 万方数据 8 南昌大学学报( 医学版) 2 0 1 0 年1 月,第5 0 卷第l 期 3
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- EPO 阿霉素 所致 心衰 大鼠 氧化 应激 能力 细胞 水平 影响
链接地址:https://www.31doc.com/p-3655769.html