GTB等位基因278C>T导致的BW变异型.pdf
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1、1 0 0 中国 输血杂志2 0 0 6 年第1 9 卷增刊( 中国 瀚血协,举四届 偷血大会 二 突自分组沮台 二易 淤耳 的 G T B等位基因 2 7 8 C T导致的 B w变异型 许先国洪小珍刘瑛吴俊杰马开荣朱发明严力行 ( 浙江省血液中心输血研究所, 卫生部血液安全研究重点实验室 杭州 3 1 0 0 0 6 ) B 抗原是在a 1 , 3 半乳糖 基转移酶( G T B 酶) 催化 下, 将供给底物U D P - G a l 的半乳糖基转移到接受底物 H糖 链上形成的。目 前确认的B 变异型主要有B 3 , B x , B m , B e l 和B w等5 类, B w 是一类频
2、率相对较高的B 变异型, 共发现1 0 种遗传性B w等位基因, 均由G T B等位基因 错义突变引 起 a - . , 笔者在前期研究中报道 了中 国人群中 因7 2 1 C T突 变导致的B W 0 3 等位基因 3 1 , 在对I 个B 抗原弱表达的研究中发现, 在G T B 等 位基因第 6 外显子存在一个新的碱基错义突变。 1 材料与方法 1 . 1 对象 先证者和1 8 9 例随机无血 缘关系 样本来自 本中心 无偿献血者。 1 . 2 血清学 试剂和 方法 血型正反定型 按本实验室方 法 5 1 . 3 分 别采 用Q I A a m p B l o o d K i t 和Q I
3、 A a m p R N A B l o o d Mi n i K i t 提 取基因组D N A 和总R N A. 1 . 4 从g D N A 水平筛选和检测基因 变异 增强子、 启动子和外显子1 -7 基因片段扩增和 序列分析, 参照 本实 验室 建 立的 方 法 a 1 . 5 从c D N A水平验证基因变异 以O l i g o ( d T ) , 。 引物和M- Mu L V逆转录酶 逆转录得到c D N A第一链, 引物c 1 F ( 5 - a c c a g a c g c g g a g c c a t g - 3 ) 和c 1 R ( 5 - a g g a c g g
4、 a c a a a g g a a a c a g a - 3 ) 进行P C R反应, R T - P C R产物直 接测序( 测序引物略) 。以 1 0 P 0 T A C l o n g i n g K i t 对c D N A 扩增产物进行单 倍体分析。 1.6 P C R - S S P 法调查2 7 8 C T变异位点人 群频率( 引物略) , 以H G H基因 引物为内对照 6 ) 2结果 2 . 1 血清学检查结果 见 表 I 。 先证者 及其父亲为A B w变异型, 其母亲为正常A型。 表 1 血型血清学检测 结果 正定型反 定 型 抗一 A, B抗一 H L eA c B
5、 e 唾液抗原血清学表型 + + dJ比4 什州 先证者 父亲 母 亲 扒 A 4 十 抗一 B we a k 、 , e 分 k L e 4 十 A, H AB w 4 - 1 0 0 0 N o t t e s te d AB , 4 - F 0 4 4- 0 N o t te s te d A 2 . 2 g D NA的 A B ( ) 基因序列分析先证者及其父亲的 A B O基因除外显子 6 的 2 7 8 C / T杂合外, 其余位 点符合 A I O I B 1 0 1 杂合特征, 先证者母亲为正常的A1 0 1 0 0 1 杂合。 2 . 3 c D N A的A B O基因序列分
6、析 先证者的c D N A扩增产物 直接序列分析进一步证实了g D N A的结 果, 单倍体显 示其中一单倍体为A 1 0 1 等位 基因( 2 7 8 C , 2 9 7 A , 5 2 6 C , 6 5 7 C , 7 0 3 G , 7 9 6 C , 8 0 3 G和9 3 0 G ) , 另一 单倍体为( 2 7 8 1 , 2 9 7 G , 5 2 6 G , 6 5 7 T , 7 0 3 A , 7 9 A 6 , 8 0 3 C和9 3 0 A ) 组合, 该等位基因除2 7 8 C T变异外, 其余 序列与 B I 0 1 一致, 其中2 7 8 C T变异可引起的多肤
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- GTB 等位基因 278 导致 BW 异型
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