GA公共安全标准-GAT 383-2002 法庭科学DNA实验室检验规范.pdf
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1、 ICS 13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业行业标准 GA/T 3832002 法庭科学 DNADNA 实验室检验规范 Examination for the forensic DNA laboratory 2002-04-22 发布 2002-07-01 实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T 3832002 I 前 言 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会(CSBTS/TC179)提出并归口。 本标准主要起草单位:公安部物证鉴定中心。 本标准参加起草单位:上海市公安局、辽宁省公安厅、北京市公安局、广州市公安局、黑龙江 省公安厅。 本标准起草人:叶健、陈松、周怀谷、
2、刘冰。 中华人民共和国公安部 2002-04-24 批准 2002-07-01 实施 中华人民共和国公共安全行业标准 法庭科学 DNA 实验室检验规范 GA/T 3832002 Examination for the forensic DNA laborator 1 范围 本标准规定了法庭科学DNA实验室检验应遵守的基本要求。 本标准适用于所有从事法庭科学检验的DNA实验室。 2 定义 本标准采用下列定义。 2.1 前期检验 prior examination DNA检验前进行的预试验和确证试验。 2.2 有机溶剂法 organic extraction of DNA 通过酚-氯仿混合物萃取D
3、NA溶液中的蛋白质类有机物质,而保留DNA于水相溶液中的提取方 法。 2.3 Chelex 法 Chelex extraction of DNA 利用Chelex能有效地去除非核酸有机物的性能而提取DNA的方法。 2.4 硅珠法 silicon bead test 在硫氰酸胍条件下,利用二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中的DNA分子的性能提取DNA的方 法。 2.5 CTAB 法 cetyltrimethylammonium bromide method 利用非离子型去污剂十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)具有破坏植物细胞壁和细胞膜及硬组织, 并能与DNA形成复合物的能力,通过抽提使DNA与蛋白质
4、及多糖类物质有效分离而达到提取高纯度 DNA的目的。 2.6 聚合酶链反应 polymerase chain reaction-PCR 一个酶促的特定DNA片段扩增过程。 3 案件受理 3.1 刑事案件的送检人员需提供公、检、法、司,以及保卫部门的盖有公章的鉴定委托书或公函, 并出示本人的工作证。民事案件的送检人员需提供委托单位或个人的委托书,并出示本人的身份证 明。 3.2 送检人员需填写送检登记表,详细填写送检单位、送检人姓名、送检日期、简要案情、送检检 材名称及特征、有无作过鉴定、原鉴定单位及原鉴定结论、鉴定要求等。 3.3 接案人员在了解案情和鉴定要求后,逐一确认检材,并对检材进行编号
5、,有条件的照相固定, 最后在送检登记表上签名。 3.4 检验人员从接案人员手中受理检材时,应详细了解案情和鉴定要求,逐一核对检材后,在送检 登记表上签名。 4 检材的提取和保存 1 GA/T 3832002 2 4.1 适合 DNA 鉴定的检材包括血液(痕)、精液(斑)、唾液(斑)、毛发、组织、骨骼等生物 检材。 4.2 提取检材前注意记录检材的大小、形态等特征,必要时照相、录像固定。提取检材时必须戴手 套。提取的检材必须分别包装,在包装袋上注明检材名称、来源、数量、采集日期等,并有采集人 及采集见证人的签名。 4.3 对于活体检材,一般用医用消毒纱布或中速滤纸采集指血或耳垂血(2cm2以上)
6、,自然晾干。 可以用口腔拭子提取口腔粘膜细胞,提取前须清水漱口,检材自然晾干;或取毛发 3 根5 根。以上 检材均用纸袋包装后常温保存。 4.4 对于血痕,类似衣裤、地毯、床单上的血痕,可以剪下一部分纸袋包装后常温保存;类似衣柜、 墙壁、地面、刀、斧上的血迹可以刮取,或用生理盐水浸湿的纱线提取,自然晾干后纸袋包装常温 保存。 4.5 涉嫌性侵害的,应用棉签分别提取阴道外端、中部和后穹窿部,必要时还应注意会阴、下腹、 口腔、肛门等部位有无精液(斑),以及现场怀疑有精斑的其他检材,如床单、被褥、卫生纸、避 孕套、内裤、衣物等。所有检材应该分别提取、标明记号、自然晾干、纸袋包装后常温保存。 4.6
7、现场的可疑毛发用镊子提取,用纸折叠后置纸袋内常温保存。 4.7 含有唾液斑的检材如烟头、果核、香口胶等用镊子提取,纸袋包装后常温保存。 4.8 人流刮宫组织,取 5g 以上确认为绒毛的组织;引产胎儿,取 5g 以上的组织;羊水,取 2ml 以上的液体。提取的检材洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。 4.9 新鲜尸体,可用医用消毒纱布或中速滤纸提取血液(3cm2以上),自然晾干,纸袋包装后常温 保存。新鲜尸体也可取肌肉组织(50g以上);腐败尸体,尽量提取相对新鲜的组织,包括指甲(2 枚以上)、肋软骨(5cm以上)或者其它软骨(5g以上)、深部肌肉组织(50g以上)、毛发(10 根 以上);白骨化
8、的尸体尽可能提取指甲、长骨、牙齿、毛发。以上检材洁净容器包装、冰冻保存、 冷藏送检。 4.10 根据案件情况,注意提取对照样本。 5 前期检验 5.1 血痕检验 5.1.1 预试验联苯胺试验 5.1.1.1 试剂 a) 联苯胺无水乙醇饱和液; b) 3%过氧化氢溶液; c) 冰醋酸。 5.1.1.2 方法 取滤纸轻轻擦拭斑迹,分别加冰醋酸、联苯胺无水乙醇饱和液、3%过氧化氢溶液,立即出现翠 蓝色为阳性反应。 5.1.2 种属试验环状沉淀试验 5.1.2.1 试剂 a) 抗人血红蛋白血清或抗人血清; b) 生理盐水。 5.1.2.2 方法 取少量血痕检材,滴入适量生理盐水制成浸出液。取试管加入抗
9、人血红蛋白血清或抗人血清, 然后小心加入上述浸出液,60分钟内两液界面间出现白色沉淀环者为阳性。 5.1.3 种属试验对流免疫电泳法 GA/T 3832002 3 5.1.3.1 试剂 a) 巴比妥缓冲液; b) 高电渗琼脂糖; c) 抗人血红蛋白血清或抗人血清; d) 双蒸馏水。 5.1.3.2 方法 取高电渗琼脂糖和巴比妥缓冲液制成琼脂溶液,取琼脂溶液平铺于载玻片上,凝固后打两排成 对的孔。取少量血痕检材,滴入适量双蒸馏水或巴比妥缓冲液制成浸出液,加入上述琼脂板负极侧 孔内,在琼脂板正极侧孔内加入抗人血红蛋白血清或抗人血清,电泳30分钟40分钟。电泳完毕后 在黑色背景上方,通过斜光照射,观
10、察两孔间形成的抗原抗体复合物的白色沉淀线,有白色沉淀 线者为阳性。 5.1.4 种属试验金标试纸检验法 试剂和方法以说明书为准。 5.2 精斑检验 5.2.1 预试验酸性磷酸酶试验 5.2.1.1 试剂 a) 碳酸钙-萘酯; b) 1-氯化重氮蒽醌; c) 缓冲液:氯化钠、冰醋酸、醋酸钠。 5.2.1.2 方法 取适量碳酸钙-萘酯和1-氯化重氮蒽醌溶于缓冲液制成检测试剂,取少量可疑斑迹置白瓷板凹 内,滴加上述试剂,如检材确为精斑,在30s内即可见橘红色反应。 5.2.2 确证试验精子检出法 5.2.2.1 试剂 a) 1%酸性复红溶液; b) 1%美蓝溶液; c) 1%盐酸; d) 生理盐水。
11、 5.2.2.2 方法 取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后,涂于载玻片上,干燥后分别用1%酸性复红溶液和1% 美蓝溶液染色,1%盐酸和清水洗涤,干燥后镜检。精子头部被染成红色,而尾部被染成蓝色。 5.2.3 确证试验金标试纸检验法 试剂和方法以说明书为准。 5.3 唾液斑检验 5.3.1 淀粉酶试验 5.3.1.1 试剂 a) 0.01%淀粉溶液; b) 碘碘化钾溶液; 5.3.1.2 方法 取少量可疑斑迹加适量0.01%淀粉溶液,37温箱30分钟,加碘碘化钾溶液,呈淡黄色和无色 时为阳性反应,呈蓝色则为阴性。 6 DNA 提取 GA/T 3832002 4 6.1 有机溶剂法 6.1.1 器
12、材和试剂 a) 高速离心机; b) 水浴或干浴; c) 移液器 d) 细胞溶解缓冲液(CLB):蔗糖,MgCl2,Tris-HCl,TritonX-100; e) 蛋白溶解缓冲液(PLB):NaCl,EDTA-Na2; f) DNA提取缓冲液:Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS、DTT; g) TNE 缓冲液:Tris-HCl、EDTA、NaCl; h) TE缓冲液:Tris-HCl、EDTA; i) 5精子提取液:Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS、DTT; j) 纯化试剂; k) CentriconTM-100; l) SDS; m) DTT; n) 饱和酚和氯仿; o
13、) 无水乙醇和70%乙醇溶液; p) NaCl或NaAc; q) 蛋白酶K。 6.1.2 方法 6.1.2.1 血液 a) 取适量血液加入等体积细胞溶解缓冲液,混匀至透明; b) 离心后去上清液,沉淀中加入蛋白溶解缓冲液匀浆; c) 加入SDS和蛋白酶K,37消化4小时以上; d) 加入等体积的酚、酚和氯仿(1:1混合)、氯仿各提取一次后,加1/10体积的NaCl或NaAc 溶液和2.5倍体积的冷无水乙醇混匀,得到团状的DNA沉淀; e) 离心去上清液,沉淀中加入70%乙醇混匀; f) 离心去上清液,晾干后加入TE缓冲液备用。 6.1.2.2 混合斑 a) 剪碎带有精子的检材,加入适量TNE
14、缓冲液,37保温0.5小时1小时,加入SDS和蛋白酶 K,37保温1小时2小时消化女性上皮细胞; b) 底部带孔离心管离心分离去除载体,并去除上清液,沉淀物用TNE洗涤离心数次; c) 沉淀物内加入5精子提取液、蛋白酶K,置37消化3小时4小时; d) 以下同6.1.2.1 d)、e)、f)。 6.1.2.3 组织 a) 取少量组织(脑、肌肉等)加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆; b) 加入SDS和蛋白酶K,37消化4小时6小时。 c) 以下同6.1.2.1 d)、e)、f)。 6.1.2.4 毛干 a) 将毛干剪成3mm5mm长,无水乙醇、水、无水乙醇各冲洗一次,晾干后加入DTT、SDS、 蛋
15、白酶K、蛋白溶解缓冲液,37消化至完全溶解; b) 加入等体积的酚、酚氯仿(11混合)、氯仿各抽提一次,加入1/10体积的NaCl或NaAc 溶液和2.5倍无水乙醇,混合后-20冷冻1小时以上; GA/T 3832002 5 c) 离心去上清液,沉淀中加入70%乙醇混匀; d) 离心去上清液,晾干后加入TE缓冲液备用。 6.1.2.5 骨和牙齿 a) 以手术刀刮净骨骼和牙齿表面垢物,用温热蒸馏水冲洗两次,紫外光照射1小时。再用锤子 将牙齿砸成粉末和用电钻取出骨松质,并将其用研磨器进一步磨碎; b) 取适量骨或牙齿粉末,加入DNA提取缓冲液、蛋白酶K,于37消化过夜; c) 酚和氯仿提取,提取液
16、置CentriconTM-100中离心浓缩后,加1/10体积的NaCl和2.5倍无水乙醇 -20冰箱过夜; d) 离心去上清液,晾干加入TE缓冲液溶解后纯化,纯化试剂和方法以说明书为准。 6.2 Chelex 法 6.2.1 器材和试剂 a) 高速离心机; b) 水浴或干浴; c) 移液器; d) Chelex-100溶液; e) TNE缓冲液 f) 蛋白酶K溶液; g) SDS; h) DTT溶液; i) 双蒸馏水。 6.2.2 方法 6.2.2.1 血液和血痕 a) 取少量血液或血痕加入适量双蒸馏水,室温30分钟; b) 离心后去上清液,沉淀中加入Chelex-100,56消化30分钟;
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