HBVDNA荧光定量PCR检测的室内质控研究.pdf
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1、中国热带医学2 0 0 8 年第8 卷第7 期C H I N AT R O P f c A LM E D I c I N Ey o I 8N o 7J 1 1 J y 2 0 0 8 1 2 4 l H B V D N A 荧光定量P C R 检测的室内质控研究 吕虹m ,周亚莉1 ,张国军1 ,方芳1 ,王雅杰1 ,闰惠平2 ,康熙雄1 检验医学 摘要:目的研究H B V D N A 荧光定量P c R 检测室内质控管理体系。方法自制H B V D N A 阳性质控血清, 连续测量2 0 次,计算均值、标准差和变异系数,从第3 次开始利用即刻法进行质控,2 0 次以后利用质控图法进行质 控。
2、结果 自制阳性质控血清均一性和准确度均达到实验要求,用即刻法检测3 2 0 次质控结果均小于N 2 。数值, 在控制范围内,用质控图法检测H B V D N A 室内质控对数值的均值为5 5 4 ,标准差为O 2 2 ,C V 为3 9 ,稳定性好, 有临床应用价值,质控图利用E X c E L 表格标示出警告限和失控限,有利于动态监控质控结果。结论联合即刻法 和质控图法对于应用荧光定量P C R 的方法进行H B V D N A 检测的室内控制切实可行。 关键词:乙肝一D N A ;荧光定量;室内质控;即刻法;质控图 中图分类号:R 3 7 3 2 1 文献标识码:B文章编号:1 0 0 9
3、 9 7 2 7 ( 2 0 0 8 ) 7 1 2 4 1 一0 3 L a b o 髓t o r yq u a l i t y n t r o Io fd e t e c t i o o fl I B V D N Ab yF Q P C R L oH o n g ,Z H O UY a l i ,Z H A N GG u 0 一 j u n ,e ta 1 ( C e n t e r0 fL a b o r a t o r yd i a g n o s i s ,T i a n t 明H p i t a lA 母l i a t e dt oC 印i t a lM e d i c a lU
4、m v e r i 8 哆,B e i j i n g1 0 0 0 5 0 ,P R C l l i 腿) A b s t 翰c t :O b j e c t i v e T op r e p a r e 锄i m e m a lq 1 1 a l i t yc o n t m ls 1 1 b 8 t 锄c eo fH B V D N A1 1 s e di nr e a lt i m eq u 锄t i t a d v e P C R ,彻dc 伽:l b i n ei 璐t a I l tm e t l l o dw i t I lc 叩t m lc h 眦t o 锚t a b l i
5、 s h 跚i n t e m a lq 【l “够c o n n 试s y s t 锄 M “h o d sH B V D N A p o s i t i v eq 1 1 a l i t yc o 椭斌8 e n l mw 鼬p r e p 酬锄dd e o e c t e d2 0m 衄r e p e 醯y M e 觚v 越u e ,8 t a I l 酬d e v i a t i o n ( S D ) 肌dc o e 岱 c i e mo fv a r i a b i l i t y ( C V ) w e r ec a l c 山t e d T h ei 删m 汕0 d 锄dc 伽
6、t r o lc h a r tm e t h o dw e r e 璐e df o rq 1 1 a l i t yc 删a f t e r3 , 2 0n U 坞瑚p e c t i v e l y R 姻l d t s T h eh o m o g e r I i c i t yo fp o s i t i v ec o m r o ls e n l m 锄dt h ea c c m c ya f 脱t l l o dc o u l ds “曲t h e 静 q u e s t “t e 8 t n eq l l a u 坶c o n t r 0 1r e s u h 8o f i n
7、s t a n tm e t h o dW e r ek 旧也a nN 2 S 1 kl o go f m e 觚v a l u eo f H B V D N Ai I l t e 捌 町u a l i 竹c o n t m lw 黯5 5 4 ,吐屺s t 锄d a r dd e v i a t i o nw 船O 2 2 ,锄dt h ec o e f f i c i e m0 fv 蕊a b i u t yw 8 s3 9 C o 嗽l 璐i A n i n t e m a lq u a l i t yc o n t r o :I8 y 8 t e ml l s e di I Ir e
8、a l 妇eq 啪石l a t i v eP C 础1 船b e 髓t a 】b l i 8 h e db yc 伽出i n “o n0 fi 璐t 蚰tm e t h o dw i t h c o n t r o lc h a n hi sf e 鹪i b l ef o ri n t e m a lq u a l i t yc t r o li nd e b e c t i H B V D N A K e y 啪r d s :H B V D N A ;F 1 u o r e 毗n tq I l 舭t i 协t i ;I n t e m a lq 1 1 a l i t yc o n t r
9、o l ;I 璐t 舳tm e 也o d ;Q u a H t yc o I l t r o l ( Q C ) c 胁 随着临床基因扩增检验实验室管理暂行办法和临床 基因扩增检验实验室工作规范的贯彻实施,全国各地陆续规 范地开展荧光定量P C R 检测技术,与常规P c R 技术相比,实时 荧光定量P c R 具有特异性强,能有效解决P C R 产物污染问题、 自动化程度高等特点【I - 2 】。但由于荧光定量检测试剂盒效期 较短,连续检测2 0 次后做质控图时间较长,如果采用即刻法和 质控图法相结合对H B V D N A 室内质控进行控制,并利用 E x C E L 表格绘制动态质控图,
10、能对室内质控管理体系起到良 好的监控作用。 1 材料和方法 1 1 材料质控血清来自北京天坛医院肝病门诊肝炎患者血 清,经乙肝五项检测结果为H B s A g + 、H B e A g + 、抗H B c A b + 的 血清样本1 0 例,充分混匀;经乙肝五项、丙肝、H I V 检测全阴性 的血清样本1 0 例,充分混匀。以上两组血清样本均无黄疸、无 脂血、无溶血现象,将其进行5 6 3 0 m i n 灭活,并将以上两混 合样本以适当比例混合,使其检测预期浓度在1 0 5 一1 0 6 I U I I l l 之问。将质控品充分混匀,保证其均一性。取高压灭菌的O 5 I n l 离心管数只
11、,将上述质控品每管1 1 0 一分装至离心管中,瞬 时离心数秒,盖盖,用封口膜将其封口后直立放人一7 0 冰箱 冷冻保存。使用时取出后室温融解,震荡混匀,瞬时离心数秒 后使用;试剂使用上海复星公司H B V D N A 荧光定量P c R 检 测试剂盒;罗氏l i g h t c y c l e r 实时荧光定量P c R 仪,高速低温离 心机,恒温金属浴,微量移液器等。 1 2 方法取1 0 只阳性质控血清,在同一实验室,同一操作 人员使用同一台仪器、同批号试剂进行操作,对制备的质控品 的均一性进行检测。每次临床检测均设空白对照l 份、阴性对 照1 份、阳性质控品1 份、标准品4 份( 浓度
12、分别为7 5 1 07 I U m l 、7 5 1 0 0 I U m l 、7 5 1 0 5 I U m l 、7 5 1 0 4 I U m 1 ) ,连 续检测3 次后即可对第3 次检测结果进行质控;连续检测2 0 次后即可绘制质控图,对2 0 次以后的检测结果进行质控。 1 2 1 “即刻法”质控方法将连续的质控测定值按从小到 大的顺序排列,即x ”) ( 2 、) 【3 、X 4 X n ( X 。为最小值,) ( 1 l 为最 大值) 。计算均值( 习和标准差( s D ) ;按公式盯E 陧值= 、,;, 垒絮f 竺计算瓯触和脚触:豇下限值= 苎熹尘堑将 瓯眼值和s ,下鼠值与
13、s I 值表( 表1 ) 中的数值比较。 崇作者单位:1 首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京1 0 0 0 5 0 ;2 首都医科大学附属北京佑安医院感粢与免疫中心,北京 l o 。0 6 9 通讯作者:康熙雄。E 瑚n :0 9 0 9 2 4 9 4 8 i 蛆c o m 万方数据 1 2 4 2 c H I N A 豫O P f c A LM E D I c I _ N EV o l 8N 0 7J u J y2 0 0 8 中国热带医学2 0 0 8 年第8 卷第7 期 I 2 2 质控结果的判断 脚上限值和研下限值均小于表1 中N 2 s 对应的值时,说明测定质控值的变化
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- HBVDNA 荧光 定量 PCR 检测 室内 研究
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