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1、P O B o x 2 3 4 5 B e ij i n g 1 0 0 0 2 3 , C h i n a F a x : + 8 6 - 1 0 - 8 5 3 8 1 8 9 3 E m a i l : w c j d w j g n e t .c o m w w w .w j g n e t .c o m Wo r l d C h i n J D i g e s t o l 2 0 0 4 J u l y ; 1 2 ( 7 ) : 1 5 6 9 - 1 5 7 3 世界华人消化杂志 I S S N 1 0 0 9 - 3 0 7 9 C N 1 4 - 1 2 6 0 / R 2
2、0 0 4 年版权归世界胃肠病学杂志社 . 病 毒 性 肝 炎 VI R AL HE P A T ITI S. H B V前一 S 1 蛋白 结合蛋白大鼠同源基因的克隆化 成 军 , 盆 普 , 张 健, 王 建军 , 纪 冬, 刘 妍, 钟彦 伟, 王 琳 成军. 蓝普, 张健, 王建军, 纪冬. 刘妍, 钟彦伟。 王琳, 中国 人民解放军 第3 0 2 医院传染病研究所基因治疗研究中心 北京市 1 0 0 0 3 9 成军, 男, 1 9 6 3 - 0 8 - 1 7 生, 山乐省淄博币人, 汉族. 1 9 9 4 年北京医科大字传 染病学博士, 1 9 9 4 年美国 得克萨斯大学健康
3、科学中心III 床免疫与传染病科博 士 后. 教授, 主 任医 师, 博 士生 导师, 出 版专著5 部, 发表 论文4 0 0 篇. 中华医 学会传染 病与寄生 虫病学分会副主任委员. 国家自 然科学基金攻关项目 , N o . 0 0 3 0 1 1 4 0 2 , N o . 0 3 0 0 7 0 6 8 9 , N o . 03 9 9 7 0 6 7 4 , No . C3 0 3 7 1 2 8 8 军队九五科技攻关项目 , N o . 9 8 D O 6 3 军队回国留学人员启动基金项目 , N o . 9 8 H O 3 8 军 队 十 五 科 技攻 关 青 年 基 金项目
4、, N o . 0 1 Q 1 3 8 军队十五科技攻关项目 , N o . 0 1 M B 1 3 5 项目 负资人: 成军, 1 0 0 0 3 9 , 北京市西四环中路1 0 0 号, 中国人民 解放军第 3 0 2 医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究勇点实 b io i n f o r ma t ic s me t h o d s . T h e r a t P S I B P c D N A c o n s is t e d o f 1 4 5 5 n t , a n d e n c o d e d a p r o t e in o f 4 8 4 a a .
5、T h e id e n t it y o f r a t P S 1 B P p r o t e in t o h u m a n a n d m o u s e P S 1 B P p r o t e in s w a s 8 0 .7 9 % ( 3 9 1 / 4 8 4 ) a n d 9 2 .9 8 % ( 4 5 0 / 4 8 4 ) , r e s p e c t iv e ly . I n t h e r a t P S 1 B P p r o t e in s e q u e n c e , s e v e r a l p o t e n t ia l m o d i-
6、 f i c a t i o n d o ma i n s we r e i d e n t i f ie d . C O N C L U S I O N : R a t P S 1 B P c D N A a n d p r o t e i n q u e n c e s a r e id e n t if ie d a n d a n a ly z e d . p r i ma ry s e - 驹 室. c iG g e n e t h e r a p y . c o m . c n 电话: 0 1 0 - 6 6 9 3 3 3 9 1 传真: 0 1 0 - 6 3 8 0 1 2
7、8 3 收稿日期: 2 0 0 4 - 0 2 一 1 4接受日 期: 2 0 0 4 - 0 5 - 1 1 C h e n g J , D o n g J , Z h a n g J , Wa n g J J , J i D , L iu Y , Z h o n g Y W, Wa n g L . I d e n t if ic a t io n a n d a n a ly s is o f r a t h o m o lo g o u s g e n e t o h u m a n H B V p r e - S 1 p r o t e i n - b i n d i n g p r
8、o t e i n . S h ij ie H u a r e n X ia o h u a Z a z h i 2 0 0 4 ; 1 2 ( 7 ) : 1 5 6 9 - 1 5 7 3 I d e n t i f i c a t i o n a n d a n a l y s i s o f r a t h o mo l o g o u s g e n e t o h u ma n H B V p r e - S 1 p r o t e i n - b i n d i n g p r o t e i n J u n C h e n g , J in g D o n g , J ia n
9、 Z h a n g , J ia n - J u n Wa n g , D o n g J i, Y a n L i u , Y a n - We i Z h o n g , L i n Wa n g J u n C h e n g , J in g D o n g , J ia n Z h a n g , J ia n - J u n W a n g , D o n g J i, Y a n L iu , Y a n - W e i Z h o n g , L in W a r p , G e n e T h e r a p y R e s e a r c h C e n t e r ,
10、I n s t it u t e o f I n f e c - t i o u s D i s e a s e s , T h e 3 0 2 H o s p i t a l o f 口 面e s e H 人, B e ij i n g 1 0 0 0 3 9 , Q ti n a S u p p o r t e d b y N a t i o n a l N a t u r a l S c i e n c e F o u n d a t i o n o f C h i n a , N o . C 0 3 0 1 1 4 0 2 , N o . C 3 0 0 7 0 6 8 9 , N o
11、 . C 3 9 9 7 0 6 7 4 , N o . C 3 0 3 7 1 2 8 8 a n d R e t u rn e d S c h o l a r s h i p o f G e n e r a l L o g i s t i c s D e p a r t m e n t o f P L A , N o . 9 8 HO 3 8 C o r r e s p o n d e n c e t o : D r . J u n C h e n g , G e n e T h e r a p y R e s e a r c h C e n t e r , I n s t i t u t
12、 e o f I n f e c t i o u s D i s e a s e s , t h e 3 0 2 H o s p i t a l o f C h i n e s e P L A , 1 0 0 X i s i h u a n z h o n g R o a d , B e ij i n g 1 0 0 0 3 9 , C h i n a . c j g e n e t h e r a p y .c o m .c n R e c e iv e d : 2 0 0 4 - 0 2 - 1 4 A c c e p t e d : 2 0 0 4 - 0 5 - 1 1 摘要 目 的:
13、 利用生物信息学( b i o i n f o r m a t i c s ) 技术克隆, 鉴定人 H B s A g 前一 S 1 蛋白 结 合 蛋白 ( P S I B P ) 编 码 基因 的同 源 基因 . 方 法: 人P S I B P 由 表 达型c D N A 文库 的 噬 菌 体 展示 技 术筛 选获 得. 以 人的P S 1 B P 的c D N A 序列 作为 参照, 对于 美国 国 立卫 生研究院( N I H ) 国 立医学图书 馆( N L M ) 生 物工程信息 学研究中心( N C B I ) 建立的 核昔酸序列数据库G e n B a n k , 利 用同源基因
14、序列比 对的在线分析软件B L A S T n i g 行同源基 因序列的比对, 发现新的来源于大鼠的同源基因. 确定大 鼠P S I B P 的c D N A 序列之后, 对于大鼠P S I B P 蛋白 质一级 结构序列与人和小鼠的P S 1 B P 蛋白 质一级结构序列的同源 性进行分析. 利用在线分析软件, 对于大鼠P S I B P 一级结构 序列中潜在的修饰和功能的预测分析 Ab s t r a c t A I M: T o id e n t i份a n d a n a ly z e r a t h o m o lo g o u s g e n e t o h u - m a n
15、h e p a t it is B v ir u s ( H B V ) p r e - S i - b in d in g p r o t e in ( P S 1 B P ) c o d in g g e n e . ME T H O D S : T h e h u ma n P S I B P w a s s c r e e n e d a n d id e n t ifi e d f rom a h e p a t o c y t e e x p r e s s iv e c D N A lib r a ry b y p h a g e d is p la y t e c h n iq
16、 u e w it h p u r if ie d r e c o m b in a n t p r e - S i p r o t e in o f H B V a s t h e s o lid if ie d m a t r ix . T h e n u c le o t id e s e q u e n c e d a t a b a s e G e n B a n k , e s t a b lis h e d b y N a t io n a l C e n t e r f o r B io t e c h n o lo g y I n f o r m a t io n ( N C
17、 B I ) , N a t io n a l L ib r a ry o f M e d ic in e ( N L M ) , N a t io n a l I n s t it u t e o f H e a lt h ( N I H ) , w a s s e a r c h e d f o r r a t c D N A s e q u e n c e h o m o l o g o u s t o h u m a n P S 1 B P c D N A b y B L A S T n t o o ls o n l in e . A h o m o lo g o u s c D N
18、A s e q u e n c e w a s id e n t ifi e d a s t h e r a t P S 1 B P c D N A . T h e s im i la r it y a n d id e n t it y o f r a t P S 1 B P c D N A a n d a m in o a d d ( a a ) s e q u e n ces t o h u m a n a n d m o u s e P S I B P g e n e s w e r e c o m p a r e d . T h e p o t e n t i a l f u n c
19、 - t io n a l d o m a i n s w e r e p r e d ic t e d b y o n lin e a n a ly s is t o o ls . R E S U L T S : T h e h u m a n P S 1 B P c D N A w a s id e n ti fi e d b y p h a g e d is p la y t e c h n iq u e . T h e r a t P S 1 B P c D N A w a s i d e n t ifi e d b y 结 果 : 利用 噬 菌 体 展 示 技 术获 得了 人 的P
20、S 1 B P 的c D N A 序 列. 以 生物信息学技术确定了大鼠P S 1 B P 的 c D N A 及其编码 产物的 序列. 大鼠P S 1 B P 的c D N A由1 4 5 5 n t 组成, 编码产 物由4 8 4 a s 组成. 大鼠P S I B P 蛋白 质一级结构与人和小鼠 P S 1 B P 蛋白 质一级结构的同源性分别为8 0 .7 9 % ( 3 9 1 / 4 8 4 ) 和 9 2 .9 8 % ( 4 5 0 / 4 8 4 ) . 利用在线分析软件, 在大鼠P S 1 B P 蛋白 质甲级结构中 还发现了一系列潜在的蛋白 质修饰结构位点. 结 论: 大
21、 鼠 P S 1 B P 基因 及 其 编码 产 物 序列 被 确 定. 成军 , 黄蔺 张 健 王 建军, 纪冬, 刘妍, 钟彦 伟 王 琳. H B V 前- S 1 蛋白 结合 蛋白 大鼠同源 基因的克隆 化. 世界 华人消化 杂志 2 0 0 4 ; 1 2 ( 7 ) : 1 5 6 9 - 1 5 7 3 h t t p :/ / w w w .叫g n e t . c o m / 1 0 0 9 - 3 0 7 9 / 1 2 / 1 5 6 9 . a s p 0 引言 乙型 肝炎病毒( H B V ) 的 包 膜蛋白由 表面 抗原( H B s A g ) 基 因 编 码,
22、因 为H B s A g 编 码基因 存在着2 段 启动子调节 序列, 而且在基因 序列中存在3 个串 连的 框架内( i n 1 5 7 0I S S N 1 0 0 9 - 3 0 7 9 C N 1 4 - 1 2 6 0 / R世界华人消 化杂志 2 0 0 4 年7 月1 5 日 第1 2 卷 第7 期 f r a m e ) 翻译起始密码子,因 此, H B s A g 基因 可以 从不 同的起始密码子开始翻译,在同一个终止密码子处终 止翻 译过 程, 构 成不同 长 度的H B s A 岁 - 3 1. 从 第I 个 起始 密 码子开 始翻 译的 蛋白 是H B s A g 的
23、大 蛋白, 从中 间的 起始密码子开始翻 译的 蛋白 是H B s A g 的中 蛋白, 从最 下游的 起始密 码子开 始翻 译的 蛋白 是H B s A g 的 主 蛋白 . 上游和中 间 起始密码子之间的 序列成为前一 S 1 ( p r e - S 1 ) 区, 一般由1 0 8 个氨基酸 残基( a a ) 组 成. 关于H B s A g 的 前一 S 1 区的 具体功能, 虽然进行了 较长时间的 研究, 但 是还有许多方面不清楚. 我们利用c D N A文库的噬菌体 展示技术, 筛选到了 一种新的 前一 S l 结合蛋白 (p r e - S I - b i n d i n g p
24、 r o t e i n , P S I B P ) 4 , 再利用生物 信息学技术克 隆, 鉴定了大鼠的P S I B P 基因, 并进行初步分析. 1材料和方法 利用表达型c D N A文库的噬菌体展示技术的筛选,获 得了人P S I B P的编码基因序列4 - s . 以人的P S l B P的 c D N A 序 列作为参照, 对于 美国国 立卫生 研究院( N I H ) 国 立医 学图书 馆( N L M ) 生物工程信息学研究中 心( N C B I ) 建 立的核昔酸序列数据库G e n B a n k , 利用同源基因序列比 对的在线分析软件B L A S T n 进行同源基
25、因序列的比 对, 发现新的来源于大鼠的同源基因. 确定大鼠P S I B P的 c D N A 序列之后, 对于大鼠P S I B P 蛋白质一级结构序列 与人和小鼠的P S I B P 蛋白质一级结构序列的同源性进 行分析. 利用在线分析软件,对于大鼠P S I B P 一级结 构序列中潜在的修饰和功能位点进行初步的预测分析. 2 结果 利用噬菌体展示技术从c D N A文库中筛选得到的人 P S l B P 基因由1 4 3 7 n t 组成, 编码产物由4 7 8 a s 组成4 利用生物信息学技术克隆, 鉴定的大鼠P S I B P 的 基因 由1 4 5 5 n t 组成, 编码产物
26、由4 8 4 a s 组成( 图1 ) . 大鼠 P S I B P 基因序列被美国核昔酸序列数据库G e n B a n k 收 录,收录号为A Y 5 3 5 0 0 2 . 大鼠与人的同源性为8 0 . 7 9 % ( 3 9 1 / 4 8 4 ) , 大鼠 和 小鼠 的同 源 性为9 2 .9 8 % (4 5 0 / 4 8 4 ) ( 图2 ) . A T G G C T G C G G G T A G T A AC A G A G G C G G T G A T A AG C G C G G C T C G A A A M A A G S N R G G D K R G S K
27、 AGC C AGGC GGAC TC T AAC T T T C T GGGG C T GC GGC C C AC C T C GGT G S Q A D S N F L G L R P T S V G A T C C C G C T C T G A G G C G G C G G C G GC G G G G C C C C A G A A AC A A G A A G D P A L R R R R R G P R N K K C G C GGC T GGAGGA GGC T C GC T GA GGAGC C GC T GGGG C T AGAGG T A R G W R R L A
28、E E P L G L E V GAC C AGTT C C T GGAA GAT G T AC GG C T AC AAGA GC GC AC GAC C GG T D Q F L E D V R L Q E R T T G GGC T T GTT GGC AGAGGC CC C AAA T GA AC AGC T C T T C TT C GT GGAC G L L A E A P N E Q L F F V D A C T G G A C T C A A G A A A A A A G AA C C A C G C A A G AA G A G G A C C T G G G T C T
29、 G L K K K F P R K K R T W V C AGAAGAAG T C AA AG C AT C T C C AGAAAC C C C T AC GGG T T G AC C T T Q K K S K H L Q K P L R V D L GC CC T T GAGAAT C AT T C T AAGAT C C C T GC T CC C AAAGAC AT C C T T ALE N H S K I P A P K D I L GC AC AC C AGG T C C C C AA T G C C AA AAA GC T CA GGC GA AAG GAGGA G A
30、H Q V P N A K K L R R K E E C T A T G GG AGA AAC T G GC AA AGC AGG GAGAGC T GC C C AG GG A T G T G L W E K L A K Q G E L P R D V C G C AA G G C A C A G G C C C G GC TT C T T A A C C C T C C T G C A C C A A A G G C C R K A Q A R L L N P P A P K A A A AC C T GG G C C C C AG G A T A T C A T T G A G C G
31、 GC C C T T C T A T G A C C T C K P G P Q D I I E R P F Y D L T GGAACC C AAAC AA T C C T C T G GA T AAGC C T T T GA T C GG T C AGGA T W N P N N P L D K P L I G Q D GC A T T T T T T C T GGAGC AGAC C AAGAAG AAAGG T G T GAGGC GGC CA A F F L E Q T K K K G V R R P C C AC GAC T C C AC AT C AAGC C T T C C
32、C AGGT GC C T GC GGT GGAAGT G P R L H I K P S Q V P A V E V ATT C C T GC GGGAGC C T C C T AC AAC C C AAC C T T T G AA GA T C AC C AG I P A G A S Y N P T F E D H Q GC C T T GC T T C T AGAGGC C C AT GA GGT GGAGC T GC AGC GT GAG AAA A L L L E A H E V E L Q R E K G AGG C AGA AAA GC T G GAGC GAC AGC T G
33、GC C C T G C C C AC T G C AGAG E A E K L E R Q L A L P T A E C A AGC T GC T AC C C AGGAG T C C G T G TI “ T C GGGAG AT GT G T G AGGGC Q A A T Q E S V F R E M C E G C T GC T C GAA GA GT C T GA GG A T GAG GAT GGGC CA GGC T G T GC T GAG L L E E S E D E D G P G C A E C AGC C A GA GGC T GAC GA T GG GG C
34、CAC T GAGAC C T C AC C C AC T GG T Q P E A D D G A T E T S P T G GC T GC T GG T C C T GA GA AGAG GA T G GAG AAG AAG A C AG AGC AGC AG A A G P E K R M E K K T E Q Q C GGC GG C GGGAG AA GG C T GC T CGC AAG C T GC G GG T GC AGC A GGC T R R R E K A A R K L R V Q Q A GC AC T GAGGGC AGC C C GGC TT C AGC A
35、C C AAG AA C T C TT C AGGC T A A L R A A R L Q H Q E L F R L C G T GGG A T C AAGG C C C AGGT GG CC C GG AGGC T GG C AG AGC T GG C A R G I K A Q V A R R L A E L A C G C C GG A A G G A G C A G C G G C G C A T A C G G C G A C T G G C A G A G G C T G A C R R K E Q R R I R R L A E A D AA AC C C C G A A G
36、 G C T G G G A C G G C T C A A G T A C C AG GC C C C T G A C A TT K P R R L G R L K Y Q A P D I GA T GT GC AGC T C AGC T C T GAGC T A T C T GAC T CAC T C AGGAAAC T G D V Q L S S E L S D S L R K L AA GC C AGAA GG T AAC A TT C T C C GAGAC AG GTT C AA AA GC TT C C AG K P E G N I L R D R F K S F Q AAG A
37、GA AA T A T G ATT GAG CC C C GGG AA C GAGC C AAGTT C AAGC G C K R N M I E P R E R A K F K R A A A T AC A A AG T G A A G C T G G T GG A G A A G C G G G C TTT C C G C G A G A TT K Y K V K L V E K R A F R E I C AG TT G T AG Q L * 图1乙 型肝炎病毒前一 S 1 蛋白 结合蛋白大鼠同源基因及其编码产物序列 成军, 等. H B V 前一 S 1 蛋白 结合蛋白大鼠同源基因的克
38、隆化 1 5 7 1 人M A A G G S G V G G K R S S K S D A D S G F L G L R P T S V D P A L R 小鼠- - - 一N R D - E - - - - R - Q - - - - - - - - - - - - - - - - 一 大鼠 一 一 一 S N R G - D 一 一 一 K - 0 一 一 N 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 人R R R R G P R N K K R G WR R L A Q E P L G I ,E V D Q F L E D V R L Q 小鼠 - - - - - -
39、- - 一 - - - 一 - - 一 E 一 一 一 一 一 一 - 一 一 一 - - - - - 一 大鼠 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 - 一 一 一 一 E 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 - 一 一 人E R T S G G L L S E A P N E K L F F V D T G S K E K G L T K K R T K V 小鼠 - - - T - - 一A - - - - - - - - - - - - - F - R - E - - - - - - - 一 大鼠- - - T - - - - A - - - - - Q - -
40、- - - - - L - K - E P R - - - W - 人Q K K S L L L K K P L R V D L I L E N T S K V P A P K D V L A H Q V P 小鼠- - - - Q R - Q - - - - - - - A - - - H -I - - - 一 I - - - - 一 大鼠- - - - K H - Q - - - - - - - A - - - H 一 一I - - - 一I - - - - 一 人N A K K L R R K E Q L W E K L A K Q G E L P R E V R R A Q A R L
41、 L N P 小鼠- - - - - - - - - E - - - - - - - - - - - 一D - - - - - - 一S - 大鼠N - - - - - - 一 E - - - - 一 - - - - - - - - D - - - - - - 一 N - 人S A T R A K P G P Q D T V E R P F Y D L W A S D N P L D R P L V G Q D 小鼠P T P K - - - - - - - I I - - - - - - 一 N P 一 一 - - - T - - - 一 大鼠 P A P K - - - - - - - I
42、 I - - - - - - 一 N P N - - 一 K - - 一 一 对于大鼠乙型肝炎病毒前一 S 1 蛋白 结合蛋白 一级结 构序列生物信息学分析, 发现一系列潜在的蛋白 修饰 位点结构域. 例如1 个潜在的N 一 糖基化位点1 2 4 - 1 2 7 a s (N H S K ) ; 2 个潜在的C A M P , c G M P 依赖 性蛋白 激酶 磷酸 化位点1 1 一 1 4 a s ( K R g S ) , 1 0 0 - 1 0 3 a a (K K r T ) ; 3 个潜 在的 蛋白 激酶C ( P K C ) 磷酸 化位点5 - 7 a a (S n R ) ,
43、2 1 7 - 2 1 9 a s (T k K ) , 4 3 1 - 4 3 3 a a (S I R ) ; 4 个 潜在的 酪蛋白 激酶1 1 磷酸 化位点6 - 1 9 a a ( S g a D ) , 2 8 - 3 1 a a ( T s v D ) , 2 5 0 - 2 5 3 a s (T f e 功, 3 0 5 - 3 0 8 a a ( S e d E ) ; 4 个 潜在的N 一 豆 落醋酸 化修 饰位点4 - 9 a a ( G S n r G G ) , 2 4 - 2 9 a a ( G L r p T S ) , 7 5 - 8 0 a s ( G G 1
44、1 A E ) , 3 2 2 - 3 2 7 a a (G A t e T S ) ; 6 段双向 核靶向 序 列9 4 - 1 1 0 a a ( K K k e p r k k r t w v g k k s k ) , 9 5 - 1 1 1 a a ( K K e p r k k r t w v q k k s k h ) ,3 4 0 - 3 5 6 a a ( K t e g g r r r e k a a r k l r ) , 3 8 4 - 4 0 0 a s ( R R l a e l a r r k e g r r i r r ) , 3 9 6 - 4 1 2 a a
45、 ( R R i r r l a e a d k p r r l g r ) , 4 5 1 - 4 6 7 a a ( K R n m i e p r e r a k f k r k y ) ; 2 段富 含精氨酸 序列3 5 - 5 0 a s ( R r r r r g p r n k k r g w r R ) , 3 4 6 - 4 1 2 a a ( R r r e k a a r k l r v g g a a l r a a r l g h q e l f r l r g i k a q v a r r l a e l a r r k e q r r i r r l a e a
46、 d k p r r l g R ) ; 1 段富 含 谷氨酸序 列2 6 0 - 3 1 8 a a (E a h e v e l g r e k e a e k l e r g l a l p t a e q a a t q e s v f r e m c e g l l e e s e d e d g p g c a e g p E ) . 人E F F L E Q T K K K G V K R P A R L H T K P S Q A P A V E V A P A G A 小鼠A - - - - - - - - - G - R 一 Q - - - - - - - - V - -
47、- 一I - - 一 大鼠 A - 一 一 一 一 一 一 一 一 一R一P 一 一 一 一 一 一 一 V 一 一 一 一 I - 一 一 人S Y N P S F E D H Q T L L S A A H E V E L Q R Q K E A E K L E R Q L A 小鼠- - 一T - - - 一A 一 R E - - 一 - - - - - E - - 一 一 - - - - - 一 大鼠- - 一T - - - 一 A 一 L E - 一 - - - - - - E 一 一 - - - - - - - 一 人L P A T E Q A A T Q E S T F Q E
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49、 - - - - - - - 一 大鼠- E Q - - - D - G A T E T S - T G A - G P E K R M - - - - - - - - 一 人 小鼠 大鼠 E K A V H R L R V Q Q A A L R A A R L R H Q E L F R L R G I K A Q V A 一 一 ARK 一 一 一 ARK Q - - - 一 - - - - - - 一 - 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 Q 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 人L R L A E L A R R R R R R Q A R R E A E A D K P R R L G R L K Y Q A P 小鼠R - - - - - - - - - E Q - R I 一 L - - - - - - - - - - - - - - - 一 大F , R - - - - - - - - K E Q - R I 一 L - - - - 一 一 一 一 一 - - - - - - 一 人D I D V Q L S S E L T D S L R T L K P E G N I L R D R F K S F Q R R N 小鼠 - - - - - - - - - - S G
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