HSP65HBV 表位融合蛋白对人PBMC的激活作用.pdf
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1、4 0 6 C h in I b D ie g n . A p ri 1 , 2 0 0 6 , V . 1 1 0 , N . . 4 H S P 6 5 - H B V表位融合蛋白对人 P B MC的激活作用 王 华 , 尹晓 光2 , 吴秀丽 , 王 丽 2 , 王燕 媚 , 于 永利2 , 王丽颖 * 吉林大学基础医学院 1 . 分子生物学教研室; 2 . 免疫学教研室, 吉林 长春 1 3 0 0 2 1 ) 热 休克 蛋白 ( h e a t s h o c k p r o t e i n , H S P ) H S P 可 引导与其形成复合物或融合蛋白的抗原性物质在抗 原递呈细胞
2、内经 MH C I 类途径加工递呈, 提供激活 抗原特异性 C T L的信号。P A D R E是一种辅助 T 细胞表位, 辅助 T细胞的活化对 C T L 的激活有促 进作用。基于以上研究, 我们检测了 H S P 6 5 / P A D R E / H B V多 表位融合蛋白( H S P 6 5 - H B V e p i ) 对 P B M C 的激活作用, 为研究该融合蛋白能否激发 H B V特异 性 C T L 的研究鉴定了基础。 1 材料与方法 1 . 1 材料 H S P 6 5 - H B V e p i , H S P 6 5 蛋白为 本室制 备( L P S 1 0 0
3、E U / m g ) o F I T C - a n t i - C D 6 9 及 P E标 记的 a n t i - C D 4 , C D1 9 , C D 5 6 ( B D公 司) 。I MD M ( G I B C O ) , K 5 6 2 细 胞株为 本室保存, L D H杀伤检测 试剂盒( P r o m e g a ) o 1 . 2蛋 白刺激 P B MC S常规法分 离 P B MC , I MD M- 5 % A B血清培养于 1 2 孔板。加蛋白 H S 6 5 - H B V e p i 1 0 0 K g / m l 刺 激3 天 。 设立 培 养 基、 H
4、S P 6 5 和H S P 6 5 / H B V e p i 蛋白1 0 0 水浴热变性对照( 检 测残留L P S 的影响) 。 1 . 3 表面分子染色收集细胞, 印砂F A C S ( P B S / 0 . 5 m M E D T A / 2 % F B S ) 缓冲液 重 悬细 胞, 加1 0 荧光标记的 单抗, 冰上放置3 0 m i n , 离心洗涤, 流式 细胞仪检测。 1 . 4 L D H方法检测 N K细胞毒蛋白刺激 P B MC s 1 h , 按L D H 细胞毒检测说明书 检测 对K 5 6 2 的 杀伤 作用。 2 结果 2 . 1 H S P 6 5 - H
5、 B V e p i 对人 辅 助T 细 胞, B 细胞 和 N K 细 胞的 急 性 激 活 作用 H S P 6 5 - H B V e p i 刺 激的 P B MC中被 急性激 活的辅 助性 T细 胞 ( C D 4 C D 6 9 ) , B细胞( C D 1 9 C D 6 9 ) , N K细胞( C D 5 6 C D 6 9 ) 占 淋巴 细胞数的比 例明显高于培养基及热 变性对照组, 培养基及热变性对照组的结果没有明 显差异, 说明 样品中 残留的痕量L P S 对检侧结果没 有影响( 表 1 ) 0 表1 H S P 6 5 - H B V 呵及 对 照 刺 激 的 P
6、B MC表面分子染色结果比较 H S P 6 5 - H B V卿 C13 4 CD 6 9- C D1 9 C D 6 9 仁 D 5 6 夺 C刃 巧9 十 Me d i u m 0 . 6 0 1 . 6 9 % 1 . 3 3 % H S P 6 5 0. 8 0 % 2 . 7 9 % 1. 72% 1. 1 7% 2 . 5 2% 2 . 0 0% H B a t e d 0 . 5 5 % 1 . 5 6 % 1 . 5 5 % 2 . 2 H S P 6 5 - H B V e p i 刺激 的P B M C 对K 5 6 2 细 胞 的N K细胞毒作用H S P 6 5 -
7、H B V e p i 与H S P 6 5 对 照组刺激的 P B M C对 K 5 6 2 细胞的杀伤率明显高于 培养基对照 组( E / T 二l o o : 1 ) 。说明H S P 6 5 系列蛋 白具有 N K活性( 表 2 ) 0 表2 H S P 6 5 - H B V e p i 及 对照 利激的P B M C 对 K 5 6 2细胞的杀伤率 %1 比较 组别M e d iu m H S P 6 5 H S P 6 5 - H B V e p i S p e c i fi c l y s is 3 3 件t 5 . 8 3 9 . 8 t 1 0 刀4 5 . 7 t 3 滩
8、 井 通讯 作者 3 讨论 在免疫应答过程中, 热休克蛋白( h e a t s h o c k p r o t e i n , H S P ) 可引 导 与 其形成 复 合物 或融 合 蛋白 的抗原性物质在抗原递呈细胞内经 M H C I 类途径 加工递呈, 提供激活 抗原特异性C T L 的信 号 。此 外H S P 蛋白 具有N K活性, 对机体的 抗病毒反应很 有 意 义 , 。 辅助T 淋巴细胞反应在体液和细胞免疫反应 中都发挥重要用。P A D R E是一种辅助 T细胞表 位, 辅助 T细胞的活化对 C T L的激活有促进作 用 3 基于以上研究, 我们检测了我们所设计的 H S
9、P 6 5 / P A D R E / H B V多表位融合 蛋白( H S P 6 5 - H B - V e p i) 对P B M C 的 激活 作用 。 C D 6 9 分 子在 静 息的 淋巴细胞上不表达, 是淋巴细胞的早期活化表面标 记。 我 们的 结果 显示: H S P 6 5 - H B V e p i 融合 蛋白 具 史匡实验诊断学2 0 0 6 年4 月第1 0卷 第4 期 4 0 7 有活化辅助 T细胞、 B细胞和 N K细胞的活性。为 研 究该融合蛋白能否激发人H B V 特异性C T L 的 研 究 鉴定了基础。 参考文献: 1 B s a u S , B in d
10、 e r 川,R a m a li n g a m T , e t a l . C D 9 1 i s a c o m m o n r e c e p - f o r f o r h e a t s h o c k p r o t e in s g p 9 6 , h sp 9 0 , h s p 7 0 a n d ca l re c ti c u li n J I m m u n it y , 2 0 0 1 , 1 4 : 3 0 3 . 2 M u l th o ff C , M iz z e n L , W in c h e s t e r C C , e t a l . H e a
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