SARS冠状病毒S2蛋白对A549细胞氯通道电流的抑制作用.pdf
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1、S A R S冠状病毒S 2蛋白对A 5 4 9细胞氯通道电流的抑制作用 常全忠 胡德辉 朱玉山 陈佺 高天明 摘 要 目的 研究S A R S病毒表面相关蛋白S 2蛋白对A 5 4 9细胞氯离子通道电流的影响及其作用机制。方法 在离体培养 的A 5 4 9细胞上, 用膜片钳全细胞模式记录氯通道电流。实验分为4组。正常对照组: 记录正常A 5 4 9细胞的氯通道电流; S 2蛋白组: 在浴槽液中加S A R S病毒S 2蛋白, 终浓度5 0 g /m l; c a l p h o s t i nC+S 2蛋白组: 先在浴槽液中加c a l p h o s t i nC( 终浓度0 . 1 m
2、m o l/L) 预处 理1 0 m i n, 再观察S 2蛋白对通道电流的影响; S B 2 0 3 5 8 0+S 2蛋白组: 将S B 2 0 3 5 8 0加入电极液中( 终浓度2 0m o l/L) , 观察S 2蛋白对 通道电流的影响。结果 正常A 5 4 9全细胞氯通道电流呈外向整流特性, 对T E A、 阿米诺利不敏感, 但可被S I T S和D I D S明显抑制 (P 0 . 0 5,n= 6, 图2) 。 图1 正常A 5 4 9细胞氯通道全细胞电流特性 A .从上至下依此是指令电压曲线、A 5 4 9正常氯通道电流以及分别 给予T E A、A a m i l o r i
3、 d e、S I T S、D I D S后的通道电流。T E A(0 . 5 m m o l/L) 、 A m i l o r i d e(2 0M) 对通道电流无明显影响, 氯通道阻断剂S I T S(0 . 5 m m o l/ L) 和D I D S(0 . 1 m m o l/L) 可明显抑制氯通道电流。B .A 5 4 9细胞氯通道电 流随时间变化曲线, 在1 0 m i n内电流幅度基本稳定(n=6) 。C .电流-电压 曲线,T E A组和A m i l o r i d e组与对照组相比无显著性差异(P0 . 0 5,n= 6) ;S I T S组和D I D S组通道电流幅度明
4、显减小, 与对照组相比有显著性差 异。与对照组比较, (1)P 0 . 0 5,n=6, 图3) 。同 样,p 3 8的 特 异 性 抑 制 剂 S B 2 0 3 5 8 0预处理1 0 m i n后,S 2蛋白对氯通道电流的抑 制作用也未受明显影响( P 0 . 0 5,n= 6, 图3) 。 图3 S B 2 0 3 5 8 0和c a l p h o s t i nC对S 2蛋白抑制氯通道电流的影响 A .全细胞记录模式记录的通道电流曲线。S 2蛋白能明显减小氯通道电流, 但c a l p h o s t i nC和S B 2 0 3 5 8 0均不影响S 2蛋白的效应。B .电流-电
5、压曲 线,S 2蛋白组与对照组相比有显著性差异;c a l p h o s t i nC和S B 2 0 3 5 8 0组与S 2蛋白组相比无显著性差异。与对照组比较, (1)P 0 . 0 5(n= 6) N i g u r e 3 E f f e c t so fS B 2 0 3 5 8 0a n dc a l p h o s t i nCo n t h e i n h i b i t i o no fS 2p r o t e i n t oC l -c h a n n e l c u r r e n t 3 讨 论 A 5 4 9常用作离体研究肺泡上皮细胞功能活动和 代谢的细胞模型。型
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