SN-T 1400-2004 甘蔗流胶病菌检疫鉴定方法.pdf.pdf
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1、1 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 4 0 0 - 2 0 0 4 甘蔗流胶病 菌检疫鉴 定方法 Me t h o d s f o r t h e q u a r a n t i n e a n d i d e n t i f i c a t i o n o f X a n t h o m o n a s a x o n o p o d i s p v . v a s c u l o r u m( C o b b 1 8 9 4 ) V a u t e r i n , H o s t e , K e r s t e r& S w i n g s 1 9 9 5 2 0
2、 0 4 - 0 6 - 0 1 发布2 0 0 4 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 S N / T 1 4 0 0 -2 0 0 4 Hii吕 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国广西出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 张君潮、 黄胜光、 叶盛华、 文新。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准. S N / T 1 4 0 0 -2 0 0 4 甘 蔗 流 胶 病 菌 检 疫 鉴 定 方 法 范围 本标准规定了进境植物检疫中甘蔗流病菌的检疫和鉴定方法。 本标准适用于进境甘蔗蔗茎
3、、 甘蔗叶片中甘蔗流胶病菌的检疫和鉴定。 2 规 范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 GB / 丁4 7 8 9 . 2 8 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 3原理 甘蔗流胶病菌属于原核生物总界细菌界( P r o c a r y o t e s ) , 薄壁细菌门( G r a c i l i c u t e s
4、) , 假单胞杆菌科 ( P s e u d o m o n a d a c e a e ) , 黄单胞杆菌属( X a n t h o mo n a s ) , 地毯草流胶病黄单胞菌维管束致病变种( X. a r o - n o p o d i s p v . v a s c u l o r u m ) , 可侵 染甘蔗的 叶片和蔗茎, 形成条斑和流胶症状。 该菌引起的甘蔗流胶病有 明显的症状, 病原菌有独特培养性状和生理生化特征。病害的症状、 病原菌的形态、 病原菌的培养、 生理 生化性状以及致病性测定是鉴定甘蔗流胶病菌的依据。 仪器 和用具 4 . 1 仪器 生物显微镜、 生物培养箱等。
5、 4 . 2用具 高压灭菌器、 普通天平、 超净工作台、 酒精灯、 培养皿、 试管、 载玻片、 盖玻片、 接种针或缝纫针、 接种 环、 移液器、 小刀、 剪刀、 镊子、 玻璃棒等。 5 培养基和试剂 5 . 1 Y P G A培养基配方: 酵母膏5 g / L , 葡萄糖 2 0 g / L , 蛋白陈1 0 g / L , 琼脂 1 5 g / L, p H7 . 2 . 5 . 2 Y D C 培养基配方: 酵母膏1 0 g / L , D 一 葡萄糖2 0 g / L , 碳酸 钙2 0 g / L , 琼脂1 5 g / L , p H 7 . 2 . 5 . 3 G Y C A培养基
6、配方: 酵母膏5 g / L, 葡萄糖 5 g / L , 碳酸钙 4 0 g / L, 琼脂 1 5 g / L , 5 . 4 明胶、 升汞液( 氯化汞 1 2 g , 蒸馏水 8 0 m L, 浓盐酸1 6 mL ) , 5 . 5 磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠、 硫酸钠、 硝酸钠。 5 . 6 蛋白陈、 磷酸氢二钾、 七叶昔、 柠檬酸铁。 5 . 7 牛肉浸膏、 氯化钠、 琼脂、 可溶性淀粉。 5 . 8 产酸产气及利用碳源、 氮源试验用试剂: 木糖、 阿拉伯糖、 果糖、 葡萄糖、 甘露糖、 半乳糖、 蔗糖、 纤维 二搪、 甘油、 麦芽糖、 鼠李糖、 菊粉、 水杨昔、 甘露醇、 山犁醇、
7、半乳搪醇、 阿东糖醇. a 一 甲基一 D葡萄搪昔溶 液, 乙酸盐、 丙酸盐、 柠檬酸盐、 苹果酸盐I A拍酸盐、 乳酸盐、 苯甲酸盐、 草酸盐、 酒石酸盐、 葡萄糖酸盐, 天冬酞胺 。 S N/ T 1 4 0 0 -2 0 0 4 5 . 9 灭菌水 。 6现场检疫 在现场检疫时, 应仔细检查蔗茎、 蔗叶有无病变症状, 如发现黄色至白色纵条纹且在叶尖处较多的 叶片, 或切口有黄色至橙色的胶状团块、 蔗节上维管束变红色的蔗茎等流胶病可疑症状时, 应取样作实 验室鉴定。 在产地检疫和隔离试种期问, 还要注意检查有无生长矮小或生长点死亡的植株, 当发现可疑症状应 取样作实验室鉴定。 7 实验室鉴
8、定 7 . 1 病原菌分离纯化 7 . 1 . 1 分离纯化 发现菌脓的蔗茎或蔗叶, 直接在无菌操作条件下将菌脓用无菌水制成分离用悬液, 用 Y P G A培养 基加胆盐进行稀释分离, 置培养箱内2 7 0C- - 2 8 条件培养3 d -7 d 。然后再进行一次至二次的纯化, 最 后获得纯菌株。 7 . 1 . 2 保湿培养 将怀疑有症状而没有菌脓流出的蔗茎砍断, 栽植于湿透细砂中, 或将怀疑有症状的叶片切断, 置于 湿润的容器中。置于 2 7 0C 2 8 条件下培养4d -6 d , 在横切面上见到流出菌脓后用 7 . 1 . 工 方法获得 纯菌株。 7 . 2 病原菌形态观察及生理生
9、化测定 7 . 2 . 1 形态观察 对分离纯化获得的纯菌株, 经染色制成玻片, 在显微镜下观察形状, 测量大小. 7 . 2 . 2 菌落颜色和粘液的形成 待测菌在G Y C A或YD C培养基上划线培养, 置培养箱内2 7 0C 2 8 条件下培养3 d - 7 d , 观察菌 落的颜色和粘液的形成。 7 . 2 . 3 鞭毛染色法 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -1 9 9 4 中2 . 7 规定的 方法进行。 7 . 2 . 4 革兰氏染色法 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -1 9 9 4 中2 . 2 规定的 方法进行。 7 . 2 . 5 明胶液化试
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