SN-T 1377-2004 从精液中分离马病毒性动脉炎病毒 试验操作规程.pdf.pdf
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1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N f T 1 3 7 7 -2 0 0 4 从精液中分离马病毒性动脉炎病毒 试验操作规程 P r o t o c o l o f t h e i s o l a t i o n o f e q u i n e v i r a l a r t e r i t i s v i r u s f r o m s t a l l i o n s s e me n 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 发布 2 0 0 4 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 S N/ T 1 3 7 7
2、-2 0 0 4 前言 本标准的附录A是规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国山东出人境检验检疫局. 本标准主要起草人: 梁成珠、 朱来华、 王树锋、 王丽。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 S N/ T 1 3 7 7 -2 0 0 4 从精液中分离马病毒性动脉炎病毒 试验操作规程 范围 本标准规定了从精液中分离马病毒性动脉炎病毒试验方法。 本标准适用于从精液中分离马病毒性动脉炎病毒。 2 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 1 E A V: 马病毒性动脉炎病毒。 Z ME M: 含非必需氨基酸的细胞培养液。 仪器设备 么23
3、 3 . 1 超净工作台或生物安全柜。 3 . 2 二氧化碳培养箱。 3 . 3 倒置显微镜。 3 . 4 液氮贮存罐。 3 . 5 蔡氏滤器和微孔滤膜( 0 . 2 2 ja m) , 3 . 6 蒸汽消毒器。 3 . 7 微量细胞培养板( 9 6 孔) 。 3 . 8 微型振荡器。 3 . 9 可调微量移液器和吸嘴( 2 0 0 K L ) , 3 . 1 0 电子天平( 0 . 1 m g -2 0 0 g ) , 3 . 1 1吸管( 1 mL , 2 mL, 5 mL, 1 0 mL) , 试剂 4 . 1 抗生素贮存液。 4 . 2 7 . 5 % 碳酸氢钠溶液。 4 . 3 细胞
4、消化液( 0 . 0 2 % E D T A) 。 4 . 4 标准病毒株和细胞系: 一1 9 6 C ( 液氮) 冻存备用。 4 . 4 . 1 标准病毒株: 马病毒性动脉炎病毒( E q u i n e A r t e r i t i s V i r u s , E A V ) B u c y r u s 株。 4 . 4 . 2 细胞系: 兔肾细胞( R K - 1 3 ) , 4 . 5 细胞培养液和细胞维持液。 4 . 6 1 %细胞染色液。 4 . 7 7 . 5 %梭甲基纤维素。 5操作方法 精液 采集 准备干净、 无菌的采精管( 如假阴道、 阴茎套) 。采精管不得含有防腐剂或消
5、毒剂。 S N / T 1 3 7 7 -2 0 0 4 5 . 1 . 2 采集精液时可同时采两份, 也可在不同时间各采一份, 应采集含精子量多的部分( 射精中期) 作 为待检样品进行病毒分离。 5 . 1 . 3 采精后, 应立即将含精液的采精管放人碎冰中或冰盒中, 尽快送到实验室。如果不能及时送实 验室, 可将精液暂时冷冻于一2 0 以下保存( 不超过 7 d ) , 冷冻精液不影响病毒的分离。 5 . 2 病毒分离 5 . 2 . 1 将精液进行预处理, 超声波裂解三次, 每次1 5 S . 5 . 2 . 2 在 4 下1 0 0 0 g 离心 1 0 m i n , 沉淀精子细胞。
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