SN-T 1446.1-2004 猪传染性胃肠炎 阻断酶联免疫吸附试验.pdf.pdf
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1、r 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 4 4 6 . 1 -2 0 0 4 猪传染性胃肠炎 阻断酶联免疫吸附试验 B l o c k i n g E L I S A f o r t r a n s m i s s i b l e g a s t r o e n t e r i t i s o f s w i n e 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 发布2 0 0 4 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和匡 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 IF “ S N/ T 1 4 4 6 . 1 -2 0 0 4 m li胃 本标准的附录A为规范性附录。
2、本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 李健、 胡永强、 王巧全、 李树清。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 S N/ T 1 4 4 6 . 1 -2 0 0 4 猪传染性胃肠炎 阻断酶联免疫吸附试验 1 范围 本标准规定了猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验( E L I S A ) 试验方法。 本标准适用于猪传染性胃肠炎的检疫、 流行病学调查、 抗体水平检测以及与猪呼吸道冠状病毒 ( P R C V) 感染的区别诊断。 2 仪器设备、 试荆和材料 2 . 1 仪器设备 普通天 平、 分析天平、
3、2 0 0 Fu L 可调移液器、 精密 滴头、 恒温箱、 酶标仪、 洗板机等。 2 . 2 试 荆 配制见附录A。所有化学试剂均为分析纯。 2 . 3材料 2 . 3 . 1 猪传染性胃肠炎标准抗原微量板。 2 . 3 . 2 标准 T G E V阳性对照血清、 T G E V / P R C V阴性对照血清, P R C V阳性对照血清。 2 . 3 . 3 标准抗 T G E V单克隆抗体、 抗 T G E V/ P R C V单克隆抗体 2 . 3 . 4 辣根过氧 化物酶( H R P ) 标记的抗鼠I g G: 商业采购, 使用前对同一批号的产品进行工作浓度 测定 。 操作程序 3
4、 . 、 样品 血清或血浆。 3 . 2 操作步骤 3 . 2 . 1 使用前取出所有试剂, 平衡到室温( 2 o 0C- - 2 5 ,C ) 。将反应板/ 条做好标记 3 . 2 . 2 用洗液洗板三次, 每次 5 m i n , 最后一次拍干去除所有残留液体。 3 . 2 . 3 立即分别加人 T G E V, P R C V阳性对照血清和 T GE V / P R C V阴性对照血清到相应血清对照 孔, 1 0 0 p L / 孔。具体添加见图 1 , 3 . 2 . 4 用多通道移液器添加 P B S T到所有样品孔, 5 0 t L / 孔。然后加人未稀释的待检血清, 5 0 K
5、L / 孔, 每份样品两孔。见图 1 , 3 . 2 . 5 密封微量板, 3 7 0C温育2 h , 3 . 2 . 6 按 3 . 2 . 2 操作洗板 3 . 2 . 7 立即加人工作浓度的标准抗 T G E V单克隆抗体和抗 T G E V / P R C V单克隆抗体, 到对应血清 孔, 1 0 0 p L / 孔( 见图 1 ) , 3 . 2 . 8 密封微量板, 室温( 2 0 0C - 2 5 0 C ) 温育3 0 m i n , 3 . 2 . 9 按3 . 2 . 2 操作洗板。 3 . 2 . 1 0 加入工作浓度的H R P标记抗鼠I g G. 1 0 0 I L
6、/ 孔, 密封微量板, 室温( 2 0 0 C - - 2 5 0C ) 温育3 0 mi n 3 . 2 . 1 1 按3 . 2 . 2 操作洗板。 3 . 2 . 1 2 快速加人底物溶液, 1 0 0 Ea L / 孔, 暗盒室温( 2 0 0C -2 5 0 C ) 温育2 0 m i n左右至颜色变化。 S N/ T 1 4 4 6 . 1 -2 0 0 4 3 . 2 . 1 3 加人终止液终止反应, 5 0 p L / 孔。终止液添加顺序与底物溶液添加顺序相同。颜色由蓝色转 变为黄色。 3 . 2 . 1 4 充分振荡, 用酶标仪在波长4 5 0 n m处测吸光值( O D ,
7、 S o ) , 空气作为空白对照。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 Al A2S 5S 5S 1 3S 1 3S 2 15 2 1S 2 9S 2 95 3 7S 3 7 B1B2S 6S 6S 1 4S 1 4S 2 25 2 2S 3 0S 3 05 3 8 S 3 8 C1C2S 7 S 7S 1 5S 1 5S 2 3S 2 3S 3 15 3 1S 3 9S 3 9 DlD2S 8S SS 1 6S 1 6S 2 4S 2 45 3 2 S 3 2S 4 0S a o S 15 1S 9 S 9S 1 7S 1 7S 2 5S 2 5S 3 3S 3 3
8、S 4 1S 4 1 S 2S 2S1 0S 1 0S 1 8S 1 8S 2 6S 2 6S 3 4S 3 4S 4 2S 4 2 S 3S 3SI 1S 1 1S 1 9S 1 9S 2 7 S 2 7S 3 5S 3 5S 4 3S 4 3 S 4 S 4S1 2S 1 2S 2 0S 2 0S 2 8S 2 8S 3 6S 3 6S 4 4S 4 4 注 1 ; A l , A 2孔为T GE V阳性对照血清添加孔, B 1 , B 2 , C1 , C 2为TG E V / P R C V阴性对照血清添加孔, D 1 , D 2为 P R C V阳性对照血清添加孔。 注 2 : 5为
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