SN-T 1243-2003 国境口岸黄热病检验规程.pdf.pdf
《SN-T 1243-2003 国境口岸黄热病检验规程.pdf.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《SN-T 1243-2003 国境口岸黄热病检验规程.pdf.pdf(19页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 2 4 3 -2 0 0 3 国境 口岸 黄 热 病 检 验 规 程 E x a mi n a t i o n c o d e s f o r y e l l o w f e v e r a t f r o n t i e r p o r t 2 0 0 3 - 0 5 - 2 8 发布 2 0 0 3 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和匡 国家 质 量 监 督 检验 检 疫 总 肩 S N / T 1 2 4 3 - 2 0 0 3 目次 前言 , 。 。 , . . . . . . . . . . . . . . .
2、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 皿 1 范围 , 。 , 1 2 术语和定义 , 。 , , 。 1 3 对象 , , 。 1 4 标本的采集和处理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ,. , , , ,., . . 一 , 1 5 准备 , 1 6 实验室检验方法 1 7 生物安全及防护措施 。 . . . , . . . . . . . 。 .
3、 . . . 2 8 检验结果报告 , , , , , , , 】 , 甲 , 甲 甲 , , , , , 】 。 。 , 一2 9 阳性结果的处置 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , , , 2 附录 A( 资料性附录) 黄热病检验常用器材 3 附录 B( 资料性附录) 黄热病检验常用溶液及配制 , 4 附录 C( 规范性附录) 黄热病的实骏室检验方法 6 附录 D( 规范性附录) 黄热病实验室检验生物安全及防护措施 . . . . .
4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 参考文献 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5、 , 1 6 S N / T 1 2 4 3 -2 0 0 3 前言 本标准的附录C 、 附录D为规范性附录, 附录 A、 附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准由中华人民共和国海南出人境检验检疫局负责起草, 中华人民共和国上海出人境检验检疫、 中华人民共和国广东出人境检验检疫局参与起草。 本标准主要起草人: 黄迁学、 易厚广、 章琪、 潘德观。 本标准为首次发布的检验检疫行业标准。 S N/ T 1 2 4 3 -2 0 0 3 国境 口岸黄热病检验规程 范 围 本标准规定了国境口岸黄热病的检验对象、 检验方法、 检验结果报告、 阳性结果处置. 本标准适用
6、于国境口岸的黄热病检验。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2 . 1 黄热病y e ll o w f e v e r 由黄热病毒引起的急性传染病, 主要流行于南美洲和非洲热带地区, 埃及伊蚊是黄热病的主要传播 媒介 。 3对象 3 , 1 人境人员( 黄热病染疫人、 黄热病染疫嫌疑人) 或灵长类动物。 3 . 2 国境口岸内和人境交通工具、 运输设备、 货物中所携带的黄热病传播媒介。 4 标本的采集和处理 4 . 1 病人血清 早期病人血液标本( 宜在发病三日内) 或第二第血液标本( 宜在三周至四周) 采集后, 冷藏条件下迅 速送实验室, 当日分离血清。如不能立即接种乳鼠或做细胞
7、培养, 血液标本应先放人超低温冰箱 ( -8 0 C)或液氮罐内保存。 4 . 2 组织标本 采集死亡病例的肝、 肾、 肠壁等组织, 放人低温冰箱( -3 0 0C ) , 作病毒分离或其他检测用 4 . 3 蚊体标本 采集的蚊子待胃内血液全部消化后冰冻致死, 并经处理后, 取上清液接种于细胞或乳鼠 4 . 4 标本标识 采集的标本应进行标识 连同相关记录一并送实验室。 准备 检验设备、 器材、 试剂的准备参见附录 A和附录 B . 6实验室检验方法 国境 口岸黄热病实验室的检验方法如下: 核酸分子检测; 抗体检测; 抗原检测; 病毒分离鉴定。 具体检验方法见附录 C S N/ T 1 2 4
8、 3 -2 0 0 3 7 生物安全及防护措施 黄热病实验室的生物安全及防护措施按照附录D的规定操作。 8 检验结果报告 8 . 1 根据检验结果, 未分离到黄热病毒时, 报告为“ 未检出黄热病毒” 。 8 . 2 根据检验结果, 分离到黄热病毒时, 报告为“ 检出黄热病毒” 。 8 . 3 患者双份血清中, 若恢复期血清抗体效价较急性期增高四倍以上可报告为黄热病抗体阳性, 单份 血清 馆M抗体 1, 4 0以上可报告为黄热病 烤M抗体阳性; 单份血清的血凝抑制抗体滴度 1, 3 2 0 、 补体 结合抗体滴度 1:1 6以上, 结合临床表现具有诊断意义。 9 阳性结果的处置 对初次病毒分离株
9、及相应标本应送上级实验室( 或指定的实验室) 做复检或鉴定。阳性结果应在 6h 内向上级主管部门及发病地的卫生行政机关报告。 S N/ T 1 2 4 3 -2 0 0 3 附录A ( 资料性附录) 黄热病检验常用器材 A l 细胞培养用器材 培养瓶; 培养管 ; 橡皮塞; 橡皮管 ; -3 7 C 恒湿培养箱; 塑料凝集盘; 聚苯乙烯微量反应板; 普通显微镜、 倒置显微镜、 荧光显微镜; 二氧化碳培养箱; 负压抽滤瓶及电动真空泵; 1 0川一 1 0 0 J 1 , 可调式微量加样器及塑料尖吸头; 蒸馏水器: 普通金属重( 双) 蒸溜器、 玻璃蒸馏器或离子交换纯水器; 层流式超净工作台( 双
10、人) , 高压蒸汽无菌器( 手提式) 。 A . 2 鸡胚培养用器材 孵育箱; 检卵箱 ; 卵盘 ; 开卵钻 。 动物试验用器材及药品 设备与器材; 普通无菌室、 无菌罩、 超净工作台、 组织研磨器、 组织捣碎机、 兽用采血针头; 药 品; 麻 醉剂; 消毒剂; 抗生素、 青霉素、 链霉素、 二性霉素 B , 血清学实验用主要器材 9 6 孔微量滴定板; 2 5川 , 5 0川 , 1 0 0川 定量加样器及塑料尖吸头; 微型混和器、 涡旋振荡器; 3 7 及5 6 水浴箱; 电动离心机( 4 0 0 0 r / min ) ; 普通冰箱; 酶标检测仪、 洗板机; 荧光显微镜及低温( -2 0
11、 0C) 冷冻切片机; 丫计数仪等; P C R仪。 S N/ T 1 2 4 3 -2 0 0 3 附录B ( 资料性 附录) 黄热病检验常用溶液及配 制 B , , 细胞培养液 B. 、 , 、 基础营界液 E a g t e , M E M, T C 1 9 9 , R P MI 1 6 4 0 , 按说明书使用。 B . 1 . 2 完全培养液 取基础营养液再添加5 0 0 - 1 0 %的新鲜胎牛血清( F C S ) 或新生小牛血清( N C S ) 及青、 链霉素( 双抗) 等 制成完全 培养液, 并用5 %碳酸氢 钠( N a H C O) 调节p H 7 . 2 p H 7
12、. 4 , B . 1 . 3 C 6 / 3 6 蚊细胞培养液 L e ib o v i t z 1 . 1 5基础营养液内加1 0 %胰蛋白际, 1 0 %F C S及双抗。细胞维持液内加5 % F C S o B . 1 . 4 1 1 、 牛血清 无菌的优质新鲜胎牛血清或新生小牛血清, 应不含有支原体及其他细胞毒性物质。 B . 1 . 5 H a n k s 平衡盐溶液( 简称 H B S S ) B . 1 . 5 . 1 Ha n k s液( 2 0 X) : a ) 母液 甲( 2 0 X) 成分 氯 化钠( N a C D 1 6 0 g 氯 化钾( K C U 8 . 0
13、g 碳酸镁( Mg S O, 7 H , 0) 2 . 0 g 氯化镁( Mg C I , 6 H2 0 ) 2 . 0 g 氯化钙( C a C 1, ) 2 . 8 g ; b ) 母液乙( 2 0 X) 成分 磷酸 氢二钠( N a , H P 0 4 1 2 H 2 0 ) 3 . 0 4 g 磷酸氢 二钾( K , H P O) 1 . 2 0 g 葡萄 塘2 0 . 0 0 g (2 ) 4 g / I的酚红溶液 1 0 0 ML . 配法: 首先将中各成分逐项溶解于8 0 0 ml _ 去离子水中, 再加人酚红溶液, 混匀后用去离子水补 至1 0 0 0 mL , 并向其中加三氯
14、甲烷2 mL作为防腐剂, 置 4 冰箱保存。 B . 1 . 5 . 2 Ha n k s 使用液( 1 X) 配法: 取母液甲和母液乙各一份, 加人去离子水 1 8份, 分装后塞好瓶塞, 1 1 5 高压蒸汽灭菌 1 5 mi n , 置 室温或 4 0C冰箱可存. 可使用一个月。临用时用7 . 5 %碳酸氢钠( N a HC O , ) 调至所需的p H. B . l . 5 . 3 双抗液( 青霉素, 链霉素) : 配法: 取青霉素五瓶( 每瓶2 0 0 0 0 0 U) 及链霉素一瓶( 每瓶1 0 0 0 0 0 0 u g ) 溶于4 0 m I无菌去离子水 中, 分装, 每瓶2 m
15、l-40C保存。使用时在 9 9 m1培养基中加人 1 mL双抗液( 含青霉素2 5 0 U和链霉素 2 i 0 u g ) 即可 B . 1 . 5 . 4 消化液( 0 . 2 5 ,00 胰酶溶液) : 成分: 胰酶 2 . 5 g . Ha n k 。 液 1 0 0 0 m , 双抗液 1 0 m L , 配法: 加胰酶和抗生素于Ha n k s 氏液中, 振荡使其溶解, 总量到1 0 0 0 ml - 。过滤除菌, 分装, -2 0 C 贮存。一瓶最好用一次, 不宜反复冻融。 S N/ T 1 2 4 3 -2 0 0 3 B. 1 , 6 E a g le氏液 E a g l e
16、 溶液( 1 0 X) 母液甲( 1 0 X) 配法抓化钠 6 8 . 0 g , 抓化钾 4 . 0 g 溶于 8 0 0 M I去离子水, I , , 硫酸镁( Mg S O, . 7 H 0) 2 . 0 g , 磷酸二氢钠( N a H, P O , . H, 0) 1 . 4 g , 葡萄糖 1 0 g , 逐项溶于 8 0 0 m去离子水中。 0 . 4 %酚红 1 0 0 mL, 母液乙( l o x) 配法氯化钙( C a C l , ) 2 . 0 g 溶于去离子水 1 0 0 mL e 配好后, 先将母液甲和母液乙分别经 1 1 5 灭菌 1 5 min , 而后再将液慢慢
17、倒人甲液中, 分装后, 置 4 冰箱保存。 E a g le 溶液使用液配法: 取一份储存液加九份离子水稀释后, 塞紧瓶塞, 贴上标签。经 1 1 5 灭菌1 5 mi n , 4 冰箱保存 备用 。 临用时, 用7 . 5 %碳酸氢钠( N a HC O, ) 调至所需 p H, B. 2血清学试 剂的配制 B . 2 . 1 硼酸盐水( P H 9 . 0 ) 母液甲( 0 . 5 m o l/ L氯化钠液) : 氯化钠8 7 . 6 8 g去离子水加至 1 0 0 0 mL . 母液乙( 0 . 5 m o l / L硼酸) : 硼酸 3 0 . 9 2 g去离子水加至1 0 0 0 M
18、I 。 母液丙( 1 m o l / I氢氧化钠溶液) : 氢氧化钠4 0 g去离子水加至1 0 0 0 m L e 0 . 5 mo l / L硼酸0 . 1 2 mo t / L : 氯化钠p H 9 . 。的硼酸盐水。 母液甲8 0 m l , , 母液乙 1 0 0 mL , 母液丙 2 4 mL , 去离子水加至1 0 0 0 m l , B . 2 . 2 Als e v e r s 液 成分: 葡萄糖 2 . 0 5 g , 拘椽酸钠0 . 8 g拘椽酸 。 . 0 5 5 g , 氯化钠0 . 4 2 g . 去离子水加至 1 0 0 mL . 配法: 上述各项试剂微热溶解后,
19、 过滤, 以1 1 5 灭菌2 0 mi n , 4 保存 B . 2 . 3 p H 7 . 2 磷酸缓冲盐*( P B S ) 成分: 磷酸 氢二钠。 . 5 6 g , 磷酸二氢钾。 . 1 4 g , 氯 化钠8 . 5 g , 去离子水1 0 0 0 m 工 。 配法: 将上述各试剂溶解后, 1 1 5 灭菌 1 5 mi n 后备用。 B . 2 , 4 李 卜 体稀释液 氯化钙( C a c l, 2 H2 0) 1 . 0 g , 氯化镁( Mg C I _ 6 H, 0 ) 0 . 2 g , 氯化钠8 . 5 g , 去离子水1 0 0 0 mL , 将 上述物质充分溶解,
20、 分装后 1 2 1 灭菌 2 0 m i n , 放置 4 冰箱中保存备用。 S N / T 1 2 4 3 -2 0 0 3 附录C ( 规范性附录) 黄热病的实验蜜检验方法 C . 1 设备和材料 C . 1 . 1 实验室建设 应符合P 。 实验室的基 本要求。 C . 1 . 2 黄热病毒检验常用器材参见附录 A, C . 1 . 3黄热病毒检验常用溶液及配制见附录 B. C . 2 检验程序 检验程序见图C . 本 组织、 血液 血清学诊断 抗体检胭 坑原检侧 技胶分子检侧 病专分离鉴定 特异性咖抗体侧定 间接免疫荧光检侧 斑点醉联免疫吸附及斑点免疫结合试验 血凝抑制试脸 补体结合
21、试脸 中和试脸 蚀斑减少试骏 双杭休夹心法醉联免疫吸附试较 直接免疫荧光检翻 放射免疫侧定 逆转录聚合醉链反应 血清学鉴定 分子生物学鉴定 -般生物学 特性盆定 血凝抑制试狡 补体结合试较 中和试验 免疫组化染色 脚联免疫位侧 技酸分子杂交 逆转录聚合醉 涟反应 核酸型试验 酸耐受性 乙硅抵抗 诊过性 电钱位查 报 告 结果 图C . 飞 黄热病检验流程图 C . 3核酸分子检测逆转录聚合酶链反应 C . 3 C . 3 样品 RNA的提取 血清标本 1 0 p L 血清 用T E 缓冲 液1 , 5 稀释, 加人5 0 可 裂解缓冲液 4 m o t / L 异硫氰 酸呱, 内 含2 5 m
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- SN-T 1243-2003 国境口岸黄热病检验规程.pdf SN 1243 2003 国境 口岸 黄热病 检验 规程 pdf
链接地址:https://www.31doc.com/p-3679281.html