SN-T 1418-2004 鸭病毒性肝炎I型病毒血清中和试验.pdf.pdf
《SN-T 1418-2004 鸭病毒性肝炎I型病毒血清中和试验.pdf.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《SN-T 1418-2004 鸭病毒性肝炎I型病毒血清中和试验.pdf.pdf(7页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N/ T 1 4 1 8 -2 0 0 4 鸭病毒性肝炎 I 型病毒血清中和试验 S e r u m n e u t r a l i z a t i o n t e s t f o r d u c k v i r u s h e p a t i t i s t y p e I v i r u s 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 发布 2 0 0 4 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和匡 国家 质 量 监 督检 验 检 疫 总 婿 S N/ T 1 4 1 8 -2 0 0 4 o il台 本标准的附录A为规范性附录, 附录B为资料
2、性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 陈琅、 黄新民、 徐海聂、 杨素、 潘文波、 廖秀云。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 S N/ T 1 4 1 8 -2 0 0 4 鸭病毒性肝炎 I 型病毒血清中和试验 范围 本标准规定了鸭病毒性肝炎 工 型病毒血清中和试验操作方法. 本标准适用于检测血清中的鸭病毒性肝炎 工 型病毒抗体。主要用于鸭病毒性肝炎的诊断及病原鉴 定 、 免疫水平 的监测和流行病学调查。 2 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 B ME: E a g l e s B a
3、s a l Me d i u m细胞基础盐培养基 2 . 2 C P E: 细胞病变。 2 3 D E K: 鸭胚肾细胞。 2 . 4 DEL: 鸭胚肝细胞 。 2 . 5 D HV 一 工: 鸭病毒性肝炎工型病毒。 2 . 6 F C S : 胎牛血清。 2 . 7 ME M: E a g l e s Mi n i m a l E s s e n t i a l Me d i u m细胞培养基。 2 日 P F U: 空斑形成单位。 2 . 9 T C I D , : : 半数细胞培养感染量. 原理 病毒感染敏感的细胞单层后, 可以在细胞单层上生长增殖, 并能产生 C P E , 使感染细胞
4、圆缩、 坏死 并形成空斑, 血清中的特异性抗体能够抑制病毒在细胞单层上生长, 血清抗体中和病毒的能力可以通过 其阻止C P E产生的程度加以测定。本中和试验是应用固定病毒量稀释血清的方法, 在D E L或D E K细 胞单层上进行中和试验, 用于鸭血清抗体的测定或病原的鉴定。 4仪器设备 4 . 2 : .; 4 . 5 高压蒸气灭菌器。 可调移液器。 二氧化碳恒温培养箱。 倒置显微镜。 除菌过滤器。 S N/ T 1 4 1 8 -2 0 0 4 5材料准备 5 . 1 鸭病毒性肝炎 1 型病毒。 5 . 2 抗鸭病毒性肝炎工型病毒的阴、 阳性血清, 使用前均以5 6 灭能 3 0 mi n
5、 后备用。 5 . 3 受检血清按常规方法采血并分离血清, 使用前均以5 6 灭能 3 0 m i n后备用。 5 . 4 溶液的配制: 见附录 A, 5 . 5 细胞培养板: 选用无菌的孔径为 5 c m平底带盖塑料培养皿, 或 9 6 孔平底带盖塑料培养板。 5 . 6 其他仪器: 如剪刀、 镊子、 平皿、 烧杯、 三角瓶、 刻度离心管、 注射器、 吸头等以1 1 2 k P a高压灭菌 3 0 m i n , 烘干后备用。 5 . 7 D E 工 _ 细胞单层的准备: 参见第 B . 1 章 5 . 8 D E K细胞悬液的准备: 参见第 B . 2章。 6 血清中和空斑减数试验 6 .
6、 1 病毒毒价测定及配备 取 D HV 一 工 用维持液将病毒液作 1 0 倍系列稀释, 每个稀释度接种三个培养皿, 按 7 . 2 . 4和7 . 2 . 5 的方法进行试验。取每个稀释度的三个培养皿的空斑平均数, 用 R e e d - Mu e n c h 法计算病毒的 P F U量, 使用前配制成含2 0 0 P F U / 0 . 1 mL的病毒悬液备用。 6 . 2 操作步骤 6 . 2 . 1 血清稀释及中和感作: 分别取阳性血清、 阴性血清、 受检血清样品, 用维持液作两倍系列稀释, 每 个稀释度加人等量病毒悬液, 然后置3 7 中和感作6 0 m i n , 每个稀释度接种三
7、个培养皿。 6 . 2 . 2 细胞对照: 设三个培养皿的正常细胞对照, 加入维持液。 6 . 2 . 3 病毒对照: 设三个培养皿的病毒对照, 将上述使用的病毒悬液稀释为 1 0 0 P F U/ 0 . 1 mL e 6 . 2 . 4 取已长满D E L细胞单层的细胞培养皿, 吸去培养液, 用维持液清洗两次, 将上述稀释及感作好 的混合液移人细胞培养皿内, 每个培养皿。 . 1 mL , 加盖后轻轻摇, 使液体均匀分布于D E L细胞单层表 面, 然后置室温( 2 0 0C-2 2 0C) 感作 3 0 mi n . 6 . 2 . 5 每培养皿加人琼脂维持液 3 m L, 加盖后, 置
8、 3 7 0 C, 3 % - 5 %二氧化碳培养箱培养4 8 h , 取出后 用偏光源( 或低倍倒置显微镜) 直接观察空斑的形成情况, 或用 1 0 %的福尔马林固定后用 1 %的结晶紫 染色观察空斑, 并记录形成空斑的数量。 6 . 3 结果判定 6 . 3 . 1 当细胞对照正常, 阳性血清效价与原滴定的效价相差 1 个滴度以内, 病毒对照的三个培养皿的 平均空斑数误差在 1 0 P F U以内时整个试验有效。 6 . 3 . 2 出现 5 0 %空斑减数的血清最高稀释倍数为该血清的抗体滴度。 微量血清 中和试验 7 . 1 病毒毒价( T C I D s a测定及配备 取D HV 一
9、工细胞适应毒用稀释液将病毒液进行 1 0 倍系列稀释, 加入 9 6 孔培养板内, 每孔 5 0 t L, 每 个稀释 度接种八个培养孔, 然后每孔加人1 0 0 川一 的D E K细 胞悬液, 然后每孔补 加稀释 液5 0 p L 。 加 盖后, 置 3 7 C, 3 % - 5 %二氧化碳培养箱培养 9 6 h , 取出观察并记录C P E , 按R e e d - Mu e n c h方法计算出 病毒的丁 C I D ;, 使用前配制成含 2 0 0 T C I D ; ., i 5 0 p L的病毒悬液备用 7 . 2 操作步骤 7 . 2 . 1 血清稀释及中和感作: 分别取阳性血清
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- SN-T 1418-2004 鸭病毒性肝炎I型病毒血清中和试验.pdf SN 1418 2004 病毒性肝炎 病毒 血清 中和 试验 pdf
链接地址:https://www.31doc.com/p-3679302.html