SN-T 1247.1-2003 猪繁殖和呼吸综合症 间接免疫荧光试验.pdf.pdf
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1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 2 4 7 . 1 -2 0 0 3 猪 繁 殖 和 呼 吸 综 合 征 间 接 免 疫 荧 光 试 验 P r o t o c o l o f i n d i r e c t i mmu n o f l u o r e s c e n c e a s s a y f o r p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e 2 0 0 3 - 0 5 - 2 8 发布2 0 0 3 - 1 2 - 0 1 实施 中华
2、人民共和匡 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 层 S N/ T 1 2 4 7 . 1 -2 0 0 3 前言 本标准 根据世界动 物卫生组织( O I E ) ( 哺乳动物、 禽和蜜蜂A和B 类疾病诊断试验和疫苗标准手 册 ( 第四版, 2 0 0 的第三部分 X . 1 2的内容编写。 本标准的附录A、 附录 B为规范性附录。 本标准由国家认证 认可 监督管理委 员会提出并 归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 孙延峰、 孙颖杰、 苏永生、 简中友、 播凤城。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 S N / T 1 2 4 7 .
3、1 -2 0 0 3 猪 繁 殖 和 呼 吸 综 合 征 间 接 免 疫 荧 光 试 验 范围 本标准规定了猪繁殖和呼吸综合征的间 接免疫荧光试验诊断方法。 本标准适用于猪繁殖和呼吸综合征的诊断、 流行病学调查、 检疫和疫情监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的 条款通过本标准的引 用而成为本标准的 条款。凡是注日 期的引 用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准. 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规
4、格和试验方法 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3 . 1 I F A 间接免疫荧光试验。 3 . 2 F I T C 异硫袱酸荧光黄。 3 . 3 P RR S 猪繁殖和呼吸综合征。 检验检疫 4 . 1 原理 接免疫荧光试验是将抗原吸附于固相载 体上, 抗原与抗体反应后, 再用荧光素标记的抗抗体与其反 应 形成抗原一 抗体一 抗抗体 复合物, 在荧光显微镜 下可见荧光。 本标准 是以9 6 孔板为载体, 将接种猪繁殖和呼吸综合 征病毒的细 胞固 定于9 6 孔板上, 依次加人被 检血 清和 用F I T C 标记的兔抗猪抗体, 反应结束后, 置 荧光显 微镜下观 察结果。 4 . 2采样
5、采集被检猪血液, 分离血清, 血清必须新 鲜透明 不溶血无污染, 密装于灭菌小瓶内, 4 或一2 0 一 3 0 冰箱 保存或冷藏条件下立即送检。 试验 前将被检血清 统一编号。 4 . 3 设备和材料 4 . 3 . 1 仪器设备 微量移液器; 保湿盒; 普通恒温箱及二氧化碳恒温箱; 普通冰箱和低温冰箱; 倒置显微镜; 荧光显微镜; S N / T 1 2 4 7 . 1 -2 0 0 3 量筒、 烧杯等。 4 . 3 . 2 材料和试剂 - MA R C - 1 4 5 或H S 2 H细胞由国 家质检总 局认可的 单位提供; - P R R S 美洲标准株A T C C V R - 2
6、3 3 2 或欧洲标准株 L V标准毒由国家质检总局认可的 单位 提供 ; - P R R S 病毒标准阳性血清和标准阴性血清由国 家质检总局认可的单位提 供; - F I T C 标记的 兔抗猪抗体由国 家质检总 局认可的 单位提供, - ME M营 养液( 含1 0 0 0 犊牛 血清) ; -P B S液( 见附录 A ) ; -E D T A- 胰蛋白酶消化液( 见附录 A ) ; 青霉素和链霉素; 犊牛血清; - 9 6 孔、 4 8 孔细胞培养板和细胞培养瓶。 4 . 4 I F A诊断板的制备 用E D T A - 胰蛋白 酶消化液消化M A R C - 1 4 5 或 H 孰H
7、细胞, 用ME M营养液 稀释成1 0 , 细胞/ m L , 加人P R R S标准毒( 美洲标准株 A T C C V R - 2 3 3 2或欧洲标准株 L V) , 使其最终浓度为 1 0 0 T C I D ,o / 2 5 p L ( T C I D s o 测定见附录B ) , 加到9 6 孔细胞培养板的1 , 3 , 5 , 7 , 9 , 1 1 列各孔内, 每孔1 0 0 1+ L 。在2 , 4 ; 6 , 8 , 1 0 , 1 2 列各孔内加人未感染病毒细胞悬液 1 0 0 p L 。将该细胞培养板置3 7 6, 5 %二氧化碳培养箱 中 培养4 8 h -7 2 h
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